绿色木霉纤维素酶CBHI基因的克隆与原核表达 (1).pdfVIP

沈阳农业大学学报 ，2012—06，43(3)：366-369 ]ournalofShenyangA~riculturalUniversity，2012—06，43(3)：366—369 绿色木霉纤维素酶 CBHI基因的克隆与原核表达 任大明 ，毕 霏 ，陈红漫 ，阚国仕 ，马 艳 ，李艳秋 ，于可济 2 (1．沈阳农业大学 生物科学技术学院，沈阳 110161；2．中国农业大学 食品科学与营养工程学院，北京 100083) 摘要 ：绿色木霉 (Trichode viride)所产生纤维素酶可将秸秆天然纤维素组分转化为可发酵 的糖 ，不仅对废物进行再利用 ，还可 以减少环境污染 。以纤维素酶工业生产菌株绿色木霉 Sn一9106总 RNA为模板 ，利用 RT—PCR技术反转录合成外切葡聚糖水解酶 (CBHI)基 因约 1545bp的cDNA片段 。该序列与 GenBank中的cbhlE00389序列 比较 ，氨基酸序列 同源性达 91％。大肠杆菌 BL21原核表达和 SDS—PAGE结果表 明，重组蛋 白分子量约为 53kDa，重组酶活力为 5．3U·mg～。 关键词 ：绿色木霉 ；外切葡聚糖水解酶 ；原核表达 ；纯化 中图分类号：Q939．97 文献标识码 ：A 文章编号：1000—1700(2012)03—0366—04 Cloning and Expression ofCBHIGenefrom Trichoderma viride in Escherichia coli RENDa-ming，BIFei，CHENHong-man ，KANGuo—shi，MAYan，LIYan-qiu，YUKe-ji (1．CollegeofBiologicalScienceandTechnology，ShenyangA culturalUniversity，Shenyang110161，China；2．CollegeofFoodScienceand NutritionalEngineering，ChinaAgriculturalUniversity，Beiging10083，China) Abstract：The cellulase produced by Trichoderma viride can convertstraw．itcan convertthe naturalcellulose into fermentable sugars．Itnotonlytakesuse ofthenaturalresources．butalso reducesenvironmentalpollution from straw burningin countryside． ThecDNA fragmentswereamplified with RT—PCR by using thetotalRNA ofstrain Sn一9106 astemplate．Th e cloned cbhIgene fragmentwas 1545bp．By comparing with sequence E00389．the identity ofamino acid sequencewas 91％ ．The cDNA was successfully expressedin Escherichiacol fBL211and themaximum activity of5．3U ·mg—wasachieved．Themolecularweightof the recombinantenzymewasabout53kDa by SDS—PAGE analysis． Key words：Trichodermaviride；glucan-cellobiohydrolase；prokaryoticexpression；purification 纤维素酶是生物转化纤维素过程 中的一类复合酶 1，包括外切葡聚糖水解酶(cellobiohydrolase，CBH)、内切 葡聚糖酶(endoglucanase，EG)1)2及 p一葡萄糖苷酶(B—glucosidase，BG)嘲。其中，CBH是降解天然纤维素的主要酶 组分 ，在打开纤维素晶体结构 ，将天然纤维素水解成无定形纤维素方面起重要作用3[1。在产纤维素酶 的丝状真 菌中，CBH是存在于真菌中的组成型纤维素酶，有 CBHI、CBHI1