浓香型白酒窖泥中一株细菌的分离鉴定.pdfVIP

第25卷第4期 四川理工学院学报(自然科学版) Vo1．25 N。． 4 2012年 8月 Journal of Sichuan University of Science＆Engineering(Natural Science Edition) Aug．2012 1111竺!! !!!==!!=!竺!!!竺!!!!!!!!竺!!竺!!!!!!!!!!!竺!!竺!!!!! ! ! !-! !! -! - ，_ !! !!- !! - 文章编号：1673·1549(2012)04-0030-03 DOI：10．3969／j．issn．1673．1549．2012．04．008 浓香型白酒窖泥中一株细菌的分离鉴定 郑若欣，冯治平，宗绪岩，卫春会，黄治国，赵 斌 (酿酒生物技术及应用I~1)ll省重点实验室 ，I~)l 自贡 643000) 摘 要：为了探讨 Biolog微生物自动鉴定系统在窖泥微生物鉴定中的应用，试验从泸州老窖浓香型 白酒发酵窖池窖泥中分离纯化得到 l株细菌。经菌落特征观察和镜检后，由Biolog微生物自动鉴定系统 鉴定为 Bacilus cereus／thuringiensis B(蜡状芽孢杆菌／苏云金芽孢杆菌B)。 关键词：窖泥；细菌；Biolog鉴定 中图分类号：Q939．1 文献标识码 ：A 窖池是生产浓香型大曲白酒的重要前提条件，好酒 必产于优质的窖池，而好的窖池则依赖于优质的窖泥。 优质窖泥中牛长着种类繁多、功能各异、有益于酿酒的 微生物菌群落，如球菌类、梭菌类 、杆菌类，以及其它已 知和未知的酿酒功能菌群类，其中，代谢己酸的梭状芽 饱杆芮是产生浓香型大曲白酒的主体香一己酸乙酯的 重要产香菌群类 ，及产其它各种呈味物质一有机酸的细 菌菌群类等⋯。因此研究窖泥中的微生物特别是微生 物的分离鉴定对改善浓香型白酒发酵环境 、促进新窖池 的老熟，提高白酒的质量有重要的指导意义。 试验从泸州老窖窖泥中分离出 1株细菌，纯化培 养，利用 Biolog微生物 自动鉴定系统对分离到的菌株进 行鉴定，为进一步研究提供较为准确的支撑资料。 I 试验材料与方法 1．1 试验材料 窖壁泥样品采 自泸州老窖股份有限公司白酒生产 窖池(乾隆年间开始使用的天成生作坊、窖龄 300年左 彳T)。于窖底中心取样，迅速置于冰盒运回，4 c保藏。 1．2 主要试剂 蛋白胨，牛肉膏(北京奥博星生物技术有限公司)， 葡萄糖、琼脂粉、95％乙醇(成都科龙公司)，BUG培养 基、巯基乙酸钠等(美国Biolog公司)。 1．3 主要仪器与设备 Biolog微生物 自动鉴定系统、浊度仪、电动移液器 (美国 Biolog公司)，显微成像系统(日本 NIKON公司)， MJ一250恒温培养箱(上海和羽良公司)。 1．4 培养基的配制 称取牛肉膏 2．5 g，蛋 白胨 5 g，琼脂粉 12 g，NaCI 2．5 g于 1000 mL的锥形瓶，加入 500 mL的蒸馏水 。， 加热溶解，塞紧棉塞，牛皮纸包扎。121℃高压湿热灭菌 15 rain，冷却至45～50℃时在超净工作台上倒平板备 用 。 1．5 分离纯化 在无菌条件下，取 0．5 g窖泥，加入 50 mL无菌水 ， 充分摇匀，自然沉淀后取上清液，得到 l0 稀释样，然后 依次制成 10一～l0。稀释样。吸取 l0～～10。菌悬液 各 0．5 mL，均匀涂布于牛肉膏蛋白胨培养基平皿，28 培养48 h后，根据菌种的生长状况，选取适当平皿，挑取 单菌落，转接于另一平皿，依照此法转接 2—3次，进行 分离纯化，根据菌落特征及革兰氏染色镜检确认为细菌 后 ，挑取单菌落移入斜面，培养后备用。 1．6 富积培养 挑取斜 面 上 的菌落 ，在 滴加 了巯基 乙酸 钠 的 BUG培养基平板上进行十字划线接种 ，37 下恒温 培养 12 h。 收稿日期 ：2012-05435 基金项目：四川省科技厅应用基础项 目(07JY029-026)；四川理工学院引进人才项 目(2007-18) 作者简介：郑若欣(1987一)，女，四川巴中人，硕士生，主要从事发酵工程方面的研究，(E·mail)miemei8724@yahoo．cn 32 四川理工学院学报(自然科学版) 2012年 8月 目前 Biolog微生物鉴定系统可用于细菌，真菌及微 生物群落研究等方面，在临床＼食品行业都得到了应用。 但是 Biolog微生物鉴定系统也存在自身的局限性，如数 据库覆盖面小，更新慢，菌种高等。因此针对本试验的 结果将 Biolog系统与各种分子方法联用 ，并选取相关 的数据分析模式对结果进行有效的处理分析将会得到 更为准确有效的结果。同时也使得 Biolog系统鉴定方 法应用范围不断扩大，为基础研究和工业生产提供更为 可