有限稀释PCR法筛选噬菌体cDNA文库目标克隆 (1).pdfVIP

一 ??一? 江苏农业科学 ????年第 ??卷第 ??期? 周 路 ，李建 华，王 丹 ，等．有限稀释 ???法筛选噬菌体 ????文库 目标克 隆???．江 苏农业科 学，????，??????：??— ??? ???：??．?????／?．????．????— ????．????．??．???? 有 限稀 释 ???法筛选 噬菌体 ????文库 目标 克 隆? 周 路 ，李建华 ，王 丹 ，高剑峰? ?新疆石河子大学生命科学学院 ，新疆 石河子 ???????? 摘 要 ：通过 已知基 因 ???序列设计 ?对特异性 引物 ，经过 ?轮有 限稀释法稀 释 ????文库 ；利用 特异性 引物作 为? 探针 ，从 ????文库 中筛选 出目的克隆 ，最终 获得 目的基 因的全长序列 。在此基 础上 ，建立 一种 以 ???为基础 ，利用? 有 限稀 释法快速 、有效筛选噬菌体 ????文库 、分离全长 目的基 因的技术体系 。? 关键词 ：有限稀释法 ；噬菌体 ；????文库 ；???? 中图分类号 ：????? 文 献标 志码 ：?? 文章编号 ：????— ????????????— ????— ??? 基 因克隆是基因工程 和分子 生物学研究 的基础 ，随着 ??? 脂粉 、琼脂糖 、低 熔点 琼脂 糖 、?????，均购 自 ???????公 司 ；? 世纪生物技术的快 速发 展 ，基因克隆技 术越来越 多被广泛应? 其余分子生 物学试剂均为国产 。? 用????。????年 ，??????????等通过 杂交 质粒 的方法第一个 成? ?·? 引姊? 功构建 ????文 库? 以来 ，????文库 构建 和筛 选 日益成 熟? 利用 ???????中公布的绵羊 ????????预测基因 ???序? 并普及 ，并成 为基 因克 隆及功能基因组研 究的基本技术? ，? 列 ，用 ??????软件对 ???序列拼 接去 载体 ，获得 目的序列 。? 是最普遍 、最 经典的克隆全长基 因序列 的基 本方法 之一。传? 将确定好 的 ???????基因序列 ，利用 比较基 因组学 方法 ，比? 统 的筛库方法 以标记核酸探 针技术为基 础 ，其 优点在 于准确? 对 寻找 ??和 ??一???区域 内的高度保 守序列 ，使 用 ???????? 性和灵敏度高 ，缺点是放 射性标记探 针容易造成 污染且 同位? ????????．?软件和 ????上 ??????— ?????工 具设计 特异性 引? 素半衰期短不稳定 ，非放 射性标记探 针 以生物 素和地高辛 为? 物 ，并提交北 京华 大基 因生物工程技术服务有限公 司合成 。? 基础 ，成本高且所需工作量 大。以 ???为基础筛选 ????文? ?．?? ???反 应 条 件?