玉米C4型PEPC全长基因的克隆与表达载体构建.pdfVIP

一 ??一? 江苏农业科学 ????年第 ??卷第 ??期? 王 雷，崔震 海，张立军．玉米 ??型 朋 ??全长基 因的克隆与表达载体构建???．江苏农业科学，????，??????：??— ??? ???：??．?????／?．????．????— ????．????．??．???? 玉米 ??型 尸? ?全长基 因的克隆与表达载体构建? 王 雷，崔震海 ，张立军? ?沈 阳农业大学生物科学技术学院／辽宁省植物基 因工程技术研 究中心 ，辽 宁沈 阳 ????????? 摘要 ：以玉米 自交 系郑 ??基因组 ???为模板 ，设计 了?对特异性引物 ，分别 ???扩增玉米 ??型磷酸烯醇式丙酮? 酸羧化酶 ??????启动子及其全长编码序列 ，利用 ??— ??????技术将两者定 向克 隆到载体 ???????一?????上 ，并对? 重组子进行测序验证 。结果表 明，该 ????启动子序列 与 ???????中的玉米 自交系 ???的同源性 为 ??．??％ ，片段长? ????????；全长编码序列同源性为 ??．??％，片段长????????。通过 ????Ⅲ和 ??????酶切载体 ???????一?????，利用? ??～??????技术将 线 性 载 体 与 之 前 获 得 的 ?个 ???片 段 连 接 ，测 序 结 果 与 预 期 序 列 一 致 ，表 明 成 功 构 建 了? ???????一?????— ????植物表达载体。对克隆和载体构建中存在的问题进行了讨论，以期为该类型基因的高效克? 隆及表 达载体的构建 提供 参考、为 ??型 ????基 因功能研 究和 ??植物遗传转化提供可用的基 因序列 。? 关键词 ：玉米 ；????；基 因克隆 ；序列分析 ；表达载体构建? 中图分 类号 ：????；????．??? 文献标 志码 ：?? 文章编号 ：????— ????????????— ????— ??? 根据 ??：固定 初始 产物 的不同 ，可将高等植 物分成 ??、? 和作用 的发挥是十分必要 的。? ??、???这 ?类 。以三碳化合物 ?一磷 酸甘油酸为最初光合? 另外 ，??关键酶基 因由于序列较长 ，即使成功克 隆，也不? 产物 的光合途径为 ??途径 ?或 卡尔文循环 ?，以四碳化合物 草? 容易连入表达载体。在传 统载体构 建方法 中，需要将基 因 的? 酰 乙酸为最初光合产物的光合途径 为 ??途径。??途径具 有? ?个末端经过酶切 修饰后插 入载体 ，不仅 要寻 找合适 的酶切? ??：浓缩机制 ，能高效利用大气 中的 ???，使 植物保持较高 的? 位点 ，而且操 作复杂 ，通常还需要构建多个 中间载体 ，并 进行? 光合效率 ?? ，因此人们大量开 展 了将 ??植物转 化为 ??植? 多次酶切连接转化 ，工作 量较大而且构建效率较低 ，尤其不适? 物的研究