组织工程学黄韧带干细胞的筛选与鉴定.pdfVIP

中国脊柱脊髓杂志 ????年第 ??卷第 ??期? ???????????????????????????????????????，????，???．??，??．??? ????? 组织工程 学黄韧带干细胞的筛选与鉴定? 韩 小博 ，李 海音 ，陈? 斌 ，常? 献 ，杨? 匡 ，张? 伟 ，周? 跃 ，李长 青? ?解 放 军 第 三 军 医 大 学 附 属 新 桥 医 院 骨科 ?????? 重庆 市 ?? 【摘要 】目的 ：通过 ???????????介导进行差 别粘附法筛选 出人黄韧带干细胞并进行鉴定 。探讨其作为组织工程? 种 子 细 胞 的 可行 性 。方 法 ：从 椎 间 孔 镜 或 椎 问 盘 镜 微 创 手 术 中 获取 ??例 人 黄 韧带 标 本 ，机 械一酶 消 化 法 联 合 获? 取原代 细胞 ，扩增第二代后接种于 ???????????包被过的培养瓶 。流式细胞仪检测细胞表面特异性标志物。免疫? 组 化方 法测 定 干 细胞 表 达 相 关 特 异 性 蛋 白 。使 用 干 细胞 诱 导 培 养 基 ?实 验组 ?向成 骨 、成 脂 、成 软 骨 多 向诱 导 分? 化 ，使 用 常 规 生 长 培 养 基 培 养 者 作 为 阴性 对 照 ?对 照 组 ?，分 别 行 茜 素 红 染 色 、油 红 ?染 色 、阿 利 辛 兰 染 色 鉴 定 。? ??— ??? 检 测 成 骨 、成 脂 肪 、成 软 骨基 因表 达 。取 同 一 患 者 的髂 骨 骨髓 提 取 骨 髓 间充 质 干 细 胞 ，统 计 学 分 析 黄 韧? 带 干细 胞 与骨 髓 间充 质 干 细 胞 的细 胞 周 期 、增 殖 能 力 和 干 性 基 因 表 达 差 异 。 结果 ：原 代 细 胞 形 态 呈 三 角 形 或 多? 角 形 ，经 ???????????介 导 粘 附 培 养 后 形 态 比较 均一 ，呈 长 梭 形 克 隆群 。流 式 细 胞仪 检 测 筛 选 后 的 黄 韧 带 干 细 胞? ????、????阳 性 率 ???．?％ ，?????阳性 率 ???．?％，而 ????一?为 阴 性 。实 验 组 茜 素 红染 色 呈 强 阳性 ，油红 ? 染 色? 可见大小不等脂滴呈红色 ，阿利辛 兰染色大量蛋 白聚糖 聚集呈蓝 色 ，对照组均为 阴性 。??—???测定实 验组成? 骨 基 因 ???、???、????一??、成 脂 肪 基 因 ????、???、??????、成 软 骨 基 因 ???????、???、?????显 著 上 调 ，其? 中 ????一?在 对 照 组 有 低水 平 表 达 。 免疫 组 化 显 示 黄 韧 带 干 细 胞 和 骨 髓 间 充 质 干 细胞 均表 达 ?— ???、?型胶? 原 、纤 连 蛋 白 ，但 均 不 表