4第四讲 细胞破碎 W.3 0918.pptVIP

第四章 细胞破碎  Cell Disruption;获得胞内(Intracellular)产物;根据细胞类型选择细胞破碎方法;;肽聚糖;Structure of the cell wall of the yeast Saccharomyces cerevisiae. Reproduced from Klis FM, Boorsma A, and de Groot PWJ (2006) Cell wall construction in Saccharomyces cerevisiae. Yeast 23: 185–202 and Prescott LM, Harley J, and Klein DA (1999) Microbiology, 4th edn. Boston, MA: McGraw-Hill.;两种类型;Technique;Technique;高压匀浆;微生物破碎遵循一阶反应;超声破碎;水平的珠磨;酶消化法;自溶法 （autolysis) 机理不太明确，不易控制 化学或热诱导，控制一定条件 外加溶解酶 （addition of foreign lytic enzymes） 噬菌体裂解（phage lysis）;;;选择破碎方法的依据;破碎率的测定;包涵体（Inclusion Body）;收集的沉淀中，除包涵体外，还包括许多杂质，如膜蛋白、肽聚糖、脂多糖等，给后步纯化带来困难 温和的表面活性剂、蔗糖、低浓度的弱变性剂（如尿素）或脱氧胆酸等。能溶解除去部分膜蛋白和脂质类杂质 洗涤剂浓度以溶解杂质，不溶解包涵体中表达产物为原则;溶解包含体;复性—溶解在变性溶液中的变性蛋白，当采用适当的方法除去变性剂时，一部分蛋白质可自动折叠成具有活性的正确结构，这一过程称为蛋白质的复性 复性方法—稀释法、透析法、膜过滤法等 稀释法：将溶液稀释，降低变性剂浓度，使蛋白质复性 透析法：将含有蛋白质的变性溶液用水或缓冲溶液透析，除去变性剂浓度，使蛋白质复性 ;搜索找人：生物能源评论 或 bioenergyreview