中科院生物物理所生物化学考博复习题.docx

6个简答和2个论述题 CAS-ibp-2004 名词解释： 肽平面；肽键中的C—N键具有部分双键的特征，不能自由旋转，这些现象是因共振而产生的。其结果使肽键处在一个刚性的平面上，此平面被称为肽键平面(酰胺平面)。 磷酸戊糖途径；一个葡萄糖-6-磷酸经代谢产生NADPH和核糖-5-磷酸的途径。其过程可以分为两个阶段：①六碳糖（6-磷酸-葡萄糖）脱羧形成五碳糖（5-磷酸-核酮糖），并伴有NADPH+H+和CO2的生成；②5-磷酸-核酮糖通过异构化，转酮基，转醛基与糖酵解途径联系起来。 荧光共振能量转移（FRET）；当一个荧光分子（又称为供体分子）的荧光光谱与另一个荧光分子（又称为受体分子） 的激发光谱相重叠时， 供体荧光分子的激发能诱发受体分子发出荧光， 同时供体荧光分子自身的荧光强度衰减。 简答： 1 “限制性内切酶是原核生物抵抗外界，免疫防御的一道防线”这句话如何理解。 定义：限制性核酸内切酶是可以识别特定的核苷酸序列，并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶，简称限制酶。 在 20 世纪 60 年代，人们就注意到 DNA 在感染宿主后会被降解的现象，从而提出限制性切酶和限制酶的概念。 1968 年，首次从 E.coli K 中分离到限制酶，它有特定的识别位点但没有特定的切割位点，其中切割位点离识别位点达 1000bp 以上。 1970 年，美国约翰·霍布金斯大学的 H. Smith 于偶然中发现，流感嗜血杆菌 （Haemophilus influenzae）能迅速降解外源的噬菌体 DNA ，其细胞提取液可降解 E.coli DNA ，但不能降解自身 DNA ，从而找到 HindⅡ 限制性内切酶。限制性核酸内切酶分布极广，几乎在所有细菌的属、种中都发现至少一种限制性内切酶，多者在一属中就有几十种，例如在嗜血杆菌属中（Haemophilus）现已发现的就有22种。限制作用实际就是限制酶降解外源DNA，维护宿主遗传稳定的保护机制。甲基化是常见的修饰作用，可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受到保护。通过甲基化作用达到识别自身遗传物质和外来遗传物质的目的。所以，能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌，其自身的基因组中可能有该酶识别的序列，只是该识别序列或酶切位点被甲基化了。 2 限制性内切酶2???分类及特点？ 限制性核酸内切酶（ restriction endonucleases ），简称限制酶，是一类能识别和切割双链 DNA 分子中的某些特定核苷酸序列的核酸水解酶，主要从细菌中分离得到。根据结构和功能特性，把限制酶分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型。Ⅰ型限制性内切酶既能催化宿主DNA的甲基化，又催化非甲基化的DNA的水解；而Ⅱ型限制性内切酶只催化非甲基化的DNA的水解。III型限制性内切酶同时具有修饰及认知切割的作用。 3 原核表达载体，画图表示，指出各部分的功能。 原核表达载体指：能携带插入的外源核酸序列进入原核细胞中进行表达的载体。 原核表达载体调控原件： 启动子：是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并起始RNA合成的序列，它是基因表达不可缺少的重要调控序列。在转录起始点上游5～10 bp处，有一段由6～8个碱基组成，富含A和T的区域，称为Pribnow 盒，又名TATA 盒或－10区。来源不同的启动子，Pribnow 盒的碱基顺序稍有变化。在距转录起始位点上游35 bp处，有一段由10 bp组成的区域，称为-35区。 SD序列：它们是起始密码子AUG和一段位于AUG上游3～10 bp处的由3～9 bp组成的序列。这段序列富含嘌呤核苷酸，刚好与16S rRNA 3cent;末端的富含嘧啶的序列互补，是核糖体RNA的识别与结合位点。 终止子：一个操纵子的3末端往往有特定的核苷酸序列，且具有终止转录功能，这一序列称之为转录终止子，简称终止子(terminator)。 4 酵母表达载体，画图表示，指出各部分的功能。 载体基本信息 载体名称: pYES2-CT, pYES2/CT 质粒类型: 酿酒酵母表达载体 表达水平: 高拷贝 诱导方法: 半乳糖 启动子: GAL1 克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶 5 测序引物及序列: GAL1-F: AATATACCTCTATACTTTAACGTC 3 测序引物及序列: CYC1-R: GCGTGAATGTAAGCGTGAC 载体标签: C-His, C-V5 载体抗性: 氨苄青霉素 筛选标记: URA3报告基因 克隆菌株: TOP10, E.coli 表达菌株: INVSc1, Saccharomyces cerevisiae 备注: 酿酒酵母表达载体pYES2/CT含有URA3报告基因；GAL1启动子驱动目的基因高水平表达；半乳糖诱导目基因表达，葡萄糖阻遏目