Limk1不同突变体HA融合表达载体构建及在细胞内定位 (1).pdfVIP

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2017-04-25 发布于未知
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Limk1不同突变体HA融合表达载体构建及在细胞内定位 (1).pdf

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第 ??卷? 第 ?期? ????年?月? 贵? 阳? 医? 学院学报? ???．??? ??．?? ???????????????????? ??????????????? ????．?? ?????不同突变体 ?? 融合表达载体构建及在细胞内? 定位术? 刘亚伟?，李? 翠?，何敏毅?，赵? 亮?，漆松涛?，陈剑荣。一? ??．南方医科大学南方医院神经外科，广东广州 ??????；?．南方医科大学基础医学院重大疾病的转录组及蛋白质组学教育部重点实验? 室，广东广州 ??????；?．南方医科大学珠江医院器官移植科，广东 ??? ???????? 【捅? 要 ? 目的：构建 ??? 激酶???????不同突变体的 ??融合表达载体，并在真核细胞中表达，观察这些突? 变体在细胞内定位。方法：利用聚合酶链式反应 ?????扩增 ?????全长序列，构建 ??．?????真核表达质粒；利? 用定点突变策略对 ??—?????进行核定位信号?????缺失突变，命名为 ?????．????????；用合成两条互补序列退? 火获得目标片段插入载体的策略构建 ?????????；将 ?表达质粒转染 ?????细胞，细胞免疫荧光方法以及核质? 分离后用 ???????·????检测其在细胞中定位。结果：经测序鉴定 ?????及其不同突变体序列正确，在 ?????细胞? 中高表达；其中 ??—?????在细胞质、细胞核均有表达，?????．????????主要???位于细胞质，?????．???主要定位? 于细胞核。结论：成功构建了 ?????全长及不同突变体的 ??融合表达载体，初步明确突变体在细胞内的定位。? ?关键词 ????激酶 ?；载体构建；基因表达；融合蛋白；细胞内定位；突变体? ?中图分类号????? ?文献标识码??? ?文章编号??????????????????????????? ???????????????????????????，?????????????????????????????????????????? ????????????? ????????????????????????????????????????? ??????????，???????，?????????，???????????，???????????，?????????????? ??．?????????????????????????，??????????????????????????????????????????????，????????????