RT-PCR检测毕赤酵母外源β-甘露聚糖酶基因拷贝数.pdfVIP

第 ??卷 第 ?期? 生 物 加 工 过 程? ???．?????．?? ????年 ?月? ????????????????????????????????????????? ???．????? ???：??．????／?．????．????— ????．????．??．???? ??— ???检 测 毕 赤酵 母 外 源? 一甘 露 聚 糖 酶? 基 因 拷 贝 数? 林福来?，周洪波? ，郑? 甲?，郭? 宁?，吴俊子?，吴 丽双? ??．中南大学 资源加工与生物工程学院，长沙 ??????；? ?．中南 大学 生物冶金教 育部 重 点 实验 室 ，长 沙 ???????? 摘 要 ：利 用荧光定量 ???方法检 测毕 赤酵母 外源? 一甘 露聚糖酶基 因?????拷 贝数 。以毕赤 酵母 中高度保 守基? 因三磷酸甘 油醛脱 氢酶基 因?????为 内参基 因，分别构建含有 ?? 和 ???的克隆质粒 ，进行 ??— ???反应构 建??? 和 ／??／?双标准 曲线 ；获 得 的 双标 准 曲线 具有 良好 的 重 复性 ，其 相 关 系数 ?? ?均 为 ?．???，其扩 增 效率 分 别 为? ???．?％和 ???．?％。提取 含有外源 ／????基 因的毕赤酵母 基 因组进 行 ??— ???检 测 ，通 过双标 准 曲线计算 出外源? ????基 因的拷 贝数。结果显示 ：预先 经过博 莱???素????????抗性 筛选得到的 ??株 毕赤酵母 重组菌株 中含有 ?、?、?、? ?、?和 ?个不等拷 贝的? 一甘露聚糖酶基 因。结果表 明该 方法能够 高效 快速 筛选 和鉴 定 出含有 不同外源? 一甘 露聚? 糖酶基 因拷 贝数 的毕赤 酵母 重组 菌株 。? 关键词 ：实时 荧光定量 ???；毕赤 酵母 ；基 因拷 贝数 ；卢一甘 露聚糖 酶? 中图分类号 ：???? 文献标 志码 ：?? 文章编号 ：????— ????????????—????—???