中药心复康在大鼠急性心肌梗塞后对移植骨髓间充质干细胞的保护作用的论文.docVIP

　　中药心复康在大鼠急性心肌梗塞后对移植骨髓间充质干细胞的保护作用的论文 作者：李广斌，苏金玲，姜希娟，范英昌 【摘要】 目的探讨中药心复康在大鼠急性心肌梗塞后对移植骨髓间充质干细胞（bmscs）的保护作用及其机制。方法经密度梯度离心联合贴壁筛选法培养并纯化bmscs，采用冠状动脉结扎法建立大鼠急性心肌梗塞模型，移植前以5-溴脱氧尿核苷（brdu）对移植细胞进行标记，术后采用中药心复康灌胃联合干细胞移植治疗。移植后2周elisa法检测大鼠血清血管内皮生长因子（vegf）含量；处死动物，免疫组织化学方法检测心肌损伤区vegf蛋白表达情况、brdu阳性移植细胞数和cd34+新生血管数。结果心复康联合干细胞移植治疗大鼠心肌梗塞，能提高移植细胞存活率（与细胞移植组比较plt;0.05），提高大鼠血清vegf含量（与细胞移植组比较plt;0.05），提高梗塞区vegf蛋白表达，增加梗塞区新生血管数量。 结论中药心复康对大鼠急性心肌梗塞后移植干细胞有明显的保护作用，其机制可能与心复康联合干细胞移植能更有效地促进损伤区血管新生有关。 【关键词】 心复康；心肌梗塞；骨髓间充质干细胞；血管新生 　　abstract：objectiveto discuss the protective action on transplanted bmscs by chinese traditional medicine xinfukang(xfk) after rats acute myocardial infarction. methodsbmscs ethod. the rats yocardial infarction scs ethode scs transplantation. after 2 easured serum vegf by method of elisa, the albumen vegf, cell amount of brdu(+) and neonatal vessels of cd34+ around the infarct area by method of ihc. resultsthe method of xfk bining bmscs transplantation increased livability of transplanted bmscs and serum vegf(pared scs tranplation,plt;0.05), enhanced infarct area albumen vegf and neonatal vessels. conclusionpared ply bmscs transplantation, xfk hase better protection on the transplanted bmscs. the mechanism maybe xfk can promote the vessels regeneration of infarct area. 　　key yocardial infarction； bmscs； vessel regeneration 心肌梗塞是心肌的急性坏死,病情凶险,病死率较高。.目前，骨髓间充质干细胞（bmscs）移植治疗急性心肌梗塞显示了良好的应用前景 。本研究考虑，干细胞移植治疗心肌梗塞的前提首先应该是干细胞本身在移植后能够顺利的成活下来，其存活率必然影响其作用的发挥。最近，中药联合骨髓干细胞移植治疗心肌梗塞取得了令人鼓舞的进展，显示出中药在干细胞移植过程中存在的特有优势：毒副作用小，促进干细胞增殖、分化等［1，2］。故本实验采用中药心复康干预骨髓间充质干细胞移植治疗实验性大鼠心肌梗塞，以观察中药心复康对大鼠心肌梗塞后移植骨髓间充质干细胞的保护作用。 　　1材料 em培养基（美国gibco公司），胎牛血清（fcs，美国hyclone公司），胰蛋白酶（difco），乙二胺四乙酸（edta，天津联星试剂公司），brdu (sigma公司)，cd44、cd34免疫组化试剂盒（天津联星试剂公司），brdu石蜡切片免疫组化试剂盒（天津市灏阳生物制品有限公司），vegf免疫试剂盒及elisa试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司），中药心复康（天津中医药大学第一附属医院制剂室）。 　　2 方法 　　2.1 bmscs体外分离培养和brdu标记本实验采用密度梯度离心和贴壁筛选法培养并纯化bmscs，大鼠脱颈处死,无菌条件下取双侧股骨、胫骨,适量d-hanks液冲洗骨髓,100目筛网过滤,采用percoll分离液行密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,将密度为1.073 g/ml的percoll预先置于试管的底部,然后按照1∶1的比例沿管壁缓慢滴加