内皮素1和血管内皮生长因子及缺氧诱导因子1在门脉高压性胃病中的作用的论文.docVIP

　　内皮素1和血管内皮生长因子及缺氧诱导因子1在门脉高压性胃病中的作用的论文 内皮素1和血管内皮生长因子及缺氧诱导因子1在门脉高压性胃病中的作用 【关键词】 内皮素1;血管内皮生长因子;缺氧诱导因子1;门静脉高压性胃病;免疫组化 【摘要】 目的 探讨患者胃黏膜是否有内皮素1(et1)、血管内皮生长因子(vegf)和缺氧诱导因子1(hif1)在门脉高压性胃病(phg)血流动力学调节中的意义。方法 分别采取phg、pht无phg、正常对照患者胃黏膜标本用免疫组织化学方法分别检测et1、vegf和hif1在胃黏膜中的表达。同时测定3组患者的门静脉血流量(portal venous floethods the specimens of gastric mucosa ens munohistochemical methods for the levels of et1,vegf and hif1 respectvely.at the same time,the portal vein blood floent of phg. 　　【key munohistochemistry 　　门脉高压性胃病(portal hypertensive gastropath，phg)是肝硬化或肝外型门静脉高压症(pht)的一种并发症，临床上多表现为慢性隐匿性出血，是肝硬化患者上消化道出血的重要原因。.本文采用免疫组织化学(免疫组化)技术检测内皮素1(et1)、血管内皮生长因子(vegf)和缺氧诱导因子1(hif1)在在phg患中胃黏膜表达情况，观察phg胃黏膜的组织学表现，测定phg患者的门静脉、脾静脉血流量，旨在探索phg发病机制，对phg的防治提供理论依据。 1 资料与方法 　　1.1 一般资料 选取我院2006年10月至2008年12月pht患者共60例，其中男41例，女19例;年龄22～67岁，平均年龄51.55岁;乙型、丙型肝炎肝硬化56例，酒精性肝硬化2例，原发性胆汁性肝硬化1例，隐原性肝硬化1例;肝功能按childpugh分级，a级27例，b级32例，c级1例。pht无phg组：30例符合肝硬化pht诊断标准，胃镜下无phg;phg组：30例符合肝硬化pht和phg诊断标准。正常对照组30例，男25例，女5例;年龄19～62岁，平均年龄40.85岁;对照组采用胃镜下黏膜大致正常无肝病并符合排除标准者。所有受试者于胃镜及b超检查前1周停用降门脉压药物、nasid类、生长抑素类药以及影响血管活性的药物。 　　1.2 纳入与排除标准 (1)纳入标准：肝硬化根据2000年9月中华医学会传染病与寄生虫病学会分会、肝病学分会联合修订的《病毒性肝炎防治方案》中肝硬化的诊断标准。phg内镜诊断参考1992年新意大利内镜协会(ne内的胃大弯和胃小弯胃体2块，取于胃体上部大弯和小弯共活检2块。标本要足够大，达到黏膜肌层。中性甲醛溶液固定，常规石蜡切片，4%戊二醛固定，送石家庄市第五医院病理室。 　　1.3.2 门静脉血流量(portal venous flohz，取样容积2～6 mm，取样线与血流夹角lt;60°。检查时患者暂时平静呼吸后屏气，取3次结果的平均值，同一患者每次测定门静脉系统时，取样位置固定，取样线和血流夹角保持一致。由同一名经验丰富的超声科医师操作。分别检测门静脉内径(dpv)和血流速度(vpv)脾静脉内径(dsv)和血流速度(vsv)。计算静脉血流量(q)，计算公式q=(d/2)2vπ×60(q为血流量;d为静脉直径;v血流速度)。 　　1.3.3 试剂：人抗多克隆抗体(武汉博士德生物技术公司)，sp试剂盒(北京中山生物技术公司)，氨丙基三乙氧基硅烷(apes)(北京中山生物技术公司)。 　　1.3.4 he染色：①胃组织做4 μm连续切片，经漂片后贴附于经充分冲洗经apes处理过的载玻片上。捞片后置烤箱60℃，45 min，使切片紧密薪附、染色。②et1、vegf、hif1免疫组织化学染色：石蜡包埋的胃组织以4 μm的厚度连续切片，按试剂盒步骤进行3种因子的免疫组织化学染色。③免疫组织化学染色对照设置：以磷酸盐缓冲液(pbs)代替一抗进行上述染色，作为空白对照，结果为阴性。棕褐色为阳性染色。 　　1.3.5 免疫组化结果判断标准：染色后光镜下做定性观察。取200倍高倍视野下vegf显色最强的一个视野，通过显微摄影系统摄取图像，在图像分析仪上应用免疫组化计算面积软件做定量分析代表阳性面积率。 　　1.3.6 phg积分判定标准：phg程度按改良的mcmrmark’s分级分为：无，得0分;轻度为蛇皮征和(或)淡红色斑点，得1分;重度为樱桃红斑得2分;出血得3分。phg积分判定由3位有经验的胃镜室医师