内脂素基因启动子多态性与中国人2型糖尿病脂代谢紊乱的相关性的论文.docVIP

　　内脂素基因启动子多态性与中国人2型糖尿病脂代谢紊乱的相关性的论文 内脂素基因启动子多态性与中国人2型糖尿病脂代谢紊乱的相关性 【关键词】 内脂素;多态性;2型糖尿病;血脂异常 【摘要】 目的探讨内脂素基因启动子-1535c/t多态性的分布及其与中国人2型糖尿病(t2dm)脂代谢紊乱的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术，检测208例初诊t2dm患者和162例糖耐量正常(ngt)者的内脂素基因启动子-1535c/t多态性，分析该基因多态性与腰围、bmi、血浆内脂素及血脂代谢指标的相关性。结果两组内脂素基因型分布及等位基因频率比较无统计学差异(pgt;0.05);但与tc、cc基因型患者比较，t2dm组tt基因型患者甘油三酯升高、hdl-c降低(plt;0.05)。荧光素酶活性比较，pgl3 -1535t的相对荧光素酶表达活性较pgl3 -1535c下降了约28%(plt;0.01)。结论内脂素基因启动子-1535c/t多态性与中国人t2dm脂代谢紊乱有相关性。 【关键词】 内脂素;多态性;2型糖尿病;血脂异常 　内脂素是近年来发现的一种新脂肪因子，序列分析显示其为前b细胞克隆增强因子，因在内脏脂肪组织中高表达而命名。内脂素具有类胰岛素的降糖作用，并参与脂肪代谢及多种炎症反应，已成为代谢及炎症相关疾病的研究热点。有研究发现内脂素启动子区基因snps存在有意义的变异位点，部分位点的单核苷酸多态性(snps)与2型糖尿病(t2dm)、肥胖有关〔1〕。.本文旨在探讨内脂素基因启动子-1535c/t多态性与t2dm脂代谢的关系。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料2008年1月至2010年8月，随机选择无亲缘关系的镇江地区汉族人370例，根据1999年(t2dm组)208例，男112例，女96例，年龄34～75岁，平均(59.37±9.68)岁;糖耐量正常(ngt组)162例，男86例，女76例，年龄33～77岁，平均(56.75±8.75)岁。两组均未接受过降糖降脂治疗，排除糖尿病急性并发症、高血压、其他心血管疾病、肝肾功能损害，各种感染、创伤与应激等影响因素。两组患者年龄、性别经统计学分析均无显著差异(pgt;0.05)，具有可比性。 　　1.2方法 　　1.2.1内脂素基因启动子-1535c/t检测采用常规酚/氯法提取两组外周血白细胞dna。目标基因pcr扩增：引物序列为上游引物：5′-acacagggaagatcaaccaa- 3′，下游引物5′-tatctgggggcagtgatggt-3′，产物片段长332 bp。循环参数为95℃ 5 min，95℃ 30 s，54.4℃ 30s，7℃ 30 s共34个循环，最后72℃延伸10 min。用1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定pcr产物。pcr扩增产物纯化后经限制性内切酶scrfi 37℃过夜，用4%琼脂糖凝胶电泳分离酶解产物片段，紫外光下观察酶切结果，判定基因型。 　　1.2.2血脂、血糖及血清内脂素检测取患者空腹12 h后静脉血，用全自动生化仪检测血清总胆大醇(tc)、三酰甘油(tg)、hdl-c;葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖(fpg)、餐后2 h血糖(2hpg);放免法检测空腹胰岛素，计算胰岛素抵抗指数;高效液相法(日本京都全自动糖化血红蛋白分析仪，ha-8160)检测糖化血红蛋白(hba1c)。elisa法、美国产内脂素试剂盒　　检测血清内脂素。同时计算bmi和腰臀比。 　　1.2.3荧光素酶报告基因表达载体的构建pcr引物：5′-acacagggaagatcaaccaa-3′和5′-ctcgggccggaggacaggggccgc-3′，并用pyrobest dna多聚酶(takara)扩增人类visfatin基因上游5′近端调控区序列，pcr产物胶纯化后克隆到pbluescript (stratagene)〔2〕。经测序无误后构建包含内脂素基因-1535c/t多态性的两种表达载体pgl3 -1535t及pgl3 -1535c。 　　1.2.4双荧光素酶活性测定按promega公司提供的双荧光素酶检测方法进行，用1×pbs洗涤细胞2次，每瓶加入200 μl细胞裂解液收集细胞，冻融后12 000 r/min 4℃离心5 min。吸取20μl上清液加入100 μl firefly荧光素酶底物(lrⅱ)，混合后用化学发光计测定荧光素酶的发光值;再加入100 μl的反应终止液(stopg10r)，测定作为内标的荧光素酶的发光值，两者比值即为荧光素酶的相对活性。 　　1.3统计学方法采用sass11.5统计软件，数据呈非正态分布者进行对数转换;组间临床变量比较用单因素方差分析，根据基因型计算各基因型分布及等位基因频率;用sheis软件行hardy-i 25kg/m2