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western转膜条件 蛋白来源：RAW264.7 总蛋白 蛋白名称（可保密）：一些转录因子 蛋白分子量：40~70 KD WB用膜类型、孔径：0.45 NC 转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒流400 mA 转膜时间：60~90 min PS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要，?曾经因为失误，转了15 min就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别。 蛋白来源：内皮细胞 总蛋白 蛋白名称（可保密）：occludin AKT 蛋白分子量：65 KD 56 KD WB用膜类型、孔径：0.45 PVDF 转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒压 100 V 转膜时间：60~70 min 设备名字是“Bio-Rad mini”。 ? 蛋白来源：乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织 总蛋白和核蛋白 蛋白名称（可保密）：保密 蛋白分子量：65 KD 55 KD WB用膜类型、孔径：PVDF（预先用甲醇处理） 转膜方式（恒压、恒流）：半干转 恒压 12 V 转膜时间：30-40 min 设备：“Bio-Rad mini” 建议：最开始做过湿转（过夜的那种），太费事费时，效果也不如半干转。? 蛋白来源：293T细胞 蛋白名称（可保密）： 蛋白分子量：95 KD 35 KD WB用膜类型、孔径：PVDF 转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒压 90 V-110 V，控制电流不要超过300 mA。 转膜时间：70 min? 蛋白来源：肿瘤手术标本 蛋白名称（可保密）：转录因子 蛋白分子量：33 KDa WB用膜类型、孔径：PVDF膜 转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流 转膜时间：150 min 转膜设备：湿转 Bio-Rad 说明：相同条件曾用于数个30-70 KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；?实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。 蛋白来源：成纤维细胞 蛋白名称（可保密）：smad3 蛋白分子量：54 KDa WB用膜类型、孔径：PVDF膜 转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流 转膜时间：150 min 转膜设备：湿转 Bio-Rad? 蛋白来源：胰腺癌细胞 蛋白名称（可保密）： 蛋白分子量：16 KDa and 42 KDa WB用膜类型、孔径：PVDF膜 转膜方式（恒压、恒流）：120 V 恒压 转膜时间：90 min 转膜设备：湿转 Bio-Rad 蛋白来源：大鼠血管平滑肌细胞 蛋白名称（可保密）：保密 蛋白分子量：72 KD，42 KD 和22 KD WB用膜类型、孔径：一般的PVDF膜 转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流一张膜0.26 A，两张膜0.3 A。转膜时间：90 min 设备：“Bio-Rad mini” 建议：转膜缓冲液最多用3次，最好现用现配，我们用的没有加SDS，转的时候最好能用冰块一类的东西降一下温，这样转的效果要好一些，转的时候一定要把三明治每层之间的气泡除去，同时使滤纸大于膜，膜大于胶，以免烧坏电极。? 蛋白来源：大鼠PBMC 蛋白名称（可保密）：保密 蛋白分子量：55 KD WB用膜类型、孔径：0.22的PVDF膜 转膜方式（恒流）：湿转转膜时间：60-90 min 设备：“Bio-Rad mini” 建议：转膜液用过两三次之后转膜效果就很差了 其它按照常规就好了??其实0.22的膜一般不怕转过头 以我们的经验，转膜时间、电压其实?也有很大范围的调整 ，并不是非要固定于哪一个最合适，曾经做过??一张膜转，17 KD的和170 KD的，按照170 KD的条件，17 KD的转膜也很好的。 蛋白来源：人非小细胞肺癌细胞系 蛋白名称（可保密）：保密 蛋白分子量：大于250 kD WB用膜类型、孔径：millipore PVDF膜 0.45 um 转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流0.3A。转膜时间：180min 设备：“Bio-Rad ” 建议：电转保持电压在70 V以上，保持低温，如果电压低过70就需要换缓冲液了。 蛋白来源：白血病细胞 蛋白名称（可保密）：保密 蛋白分子量：28 KD WB用膜类型、孔径：0.45的NC膜 转膜方式（恒流）：湿转，90 min，0.25 A 设备：“Bio-Rad ” 建议：海绵厚度要合适，一次转磨用的海绵太薄，导致三明治没夹紧，转膜后拿出来一看，marker都变得七扭八歪。但是有前辈说垫的海绵太厚可能将胶压断，没经历过，不知道是不是会有这种情况。? 蛋白来源：肿瘤细胞 蛋白名称（可保密）：磷酸化蛋白 蛋白分子量：10-200 KDa WB用膜类型、孔径：millipore PVDF膜 0.45 um 转膜方式（恒压、恒流）：120 v 恒压 转