喉鳞癌组织中Claudin3和Ecad表达的临床意义的论文.docVIP

　　喉鳞癌组织中Claudin3和Ecad表达的临床意义的论文 喉鳞癌组织中claudin3和ecad表达的临床意义 【关键词】 喉鳞癌;claudin3;ecadherin;免疫组织化学 【摘要】 目的 检测claudin3及上皮型黏附素(ecad)在喉鳞癌中的表达，探讨二者在喉鳞癌发生发展及转移中的作用。方法 应用免疫组织化学法检测98例喉鳞癌组织及30例正常喉黏膜组织中claudin3、ecad蛋白的表达情况，并将检测结果与临床病理特征进行综合分析。结果 claudin3蛋白阳性表达主要定位于喉鳞癌癌旁正常黏膜细胞质和细胞膜，ecad蛋白阳性表达主要定位于喉鳞癌癌旁正常黏膜细胞膜，claudin3、ecad蛋白在喉鳞癌中表达的阳性率明显低于正常黏膜。喉鳞癌中claudin3和ecad蛋白的表达与肿物大小、分化程度、有无甲状软骨累及和淋巴结转移密切相关。结论 claudin3和ecad在喉鳞癌组织中表达下调，二者可能与喉鳞癌的发生发??有关，联合检测claudin3和ecad可能与喉鳞癌的预后密切相关。 【关键词】 喉鳞癌;claudin3;ecadherin;免疫组织化学 　　喉鳞癌的发生发展是涉及多个蛋白水平的变化，而细胞间的黏附力丢失常导致细胞连接的破坏〔1〕。claudin3是紧密连接的主要跨膜蛋白，此蛋白在细胞间传输转运中起重要接头作用，是细胞黏附功能的基础，研究表明claudin3在众多肿瘤组织中异常表达〔2〕。.ecad是钙依赖的黏附素家族的一个经典成员。本文应用免疫组织化学方法检测喉鳞癌组织中claudin3和ecad蛋白的表达情况，并分析其与临床病理特征的相互关系，以深入探讨二者在喉鳞癌发生发展中的作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　收集2005年8月至2008年8月本院病理科喉鳞癌切除标本作为实验组，共98例，年龄为31～79(平均51.3)岁。其中男76例，女22例，有淋巴结转移的35例，无淋巴结转移的63例，术前均未进行放化疗，同时选取30例癌旁正常黏膜组织为对照组。 　　1.2 试剂 　　实验用的兔抗人claudin3多克隆抗体由武汉博士德生物工程有限公司提供，鼠抗人ecad单克隆抗体，sp和dab显色试剂盒均由北京中杉金桥生物技术有限公司提供。 　　1.3 免疫组织化学方法检测二种蛋白的表达 　　claudin3和ecad蛋白的表达应用免疫组织化学sp法进行。主要步骤：①将5 μm切片脱蜡水化后，用pbs冲洗3次，每次3 min。②用柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复。③每张切片加1滴过氧化物阻断溶液(试剂a)，以阻断内源性过氧化物酶的活性，室温下孵育10 min。④pbs冲洗3次，每次3 min。⑤甩去pbs液，每张切片加1滴非免疫性动物血清(试剂b)，室温下孵育10 min。⑥甩去血清，每张切片加1滴第一抗体，室温下孵育60 min或4℃过夜。⑦pbs冲洗3次，每次3 min。⑧甩去pbs液，每张切片加1滴生物素标记的第二抗体(试剂c)，室温下孵育10 min。⑨pbs冲洗3次，每次3 min。⑩甩去pbs液，每张切片加1滴链霉菌抗生物素过氧化物酶溶液(试剂d)，室温下孵育10 min。pbs冲洗3次，每次3 min。甩去pbs液，每张切片加2滴新鲜配制的dab溶液，显微镜下观察3～10 min，阳性显色为棕色。自来水冲洗，苏木素复染，0.1%盐酸分化，pbs冲洗返蓝。切片经梯度酒精脱水干燥，中性树胶封固。 　　1.4 结果判定标准 　　claudin3蛋白阳性染色位于细胞膜和细胞质，光镜下以细胞膜与细胞质同时出现棕黄色着色为阳性细胞，细胞无着色或者单纯细胞质着色、细胞膜着色为阴性细胞。ecad蛋白阳性染色位于细胞膜，呈棕黄色为阳性细胞，细胞无着色或者淡黄色为阴性细胞。合并计算高倍镜下(×400)随机选择的5个视野中阳性细胞占全部计数肿瘤细胞的百分率，平均每个视野细胞质(膜)呈阳性反应的细胞数≥10%为阳性，无明显阳性反应或阳性反应的细胞数lt;10%为阴性。 　　1.5 统计学分析 　　采用sas6.12软件进行χ2检验。 　　2 结 果 　　2.1 claudin3和ecad在喉癌与正常黏膜中的表达 　　claudin3和ecad在喉鳞癌中表达的阳性率明显低于正常黏膜(plt;0.000 1)。见表1，图1。表1 claudin3和ecad在喉癌与正常黏膜中的阳性表达 　　2.2 claudin3和ecad的表达与喉鳞癌临床病理特征的关系 　　喉鳞癌claudin3和ecad蛋白的表达与肿物大小、分化程度、有无甲状软骨累及和淋巴结转移情况密切相关，而与患者的年龄及性别无明显相关。见表2