大肠癌中EGFR、cerbB2及VEGF的表达与临床病理特征的关系的论文.docVIP

　　大肠癌中EGFR、cerbB2及VEGF的表达与临床病理特征的关系的论文 【摘要】 目的 研究egfr、cerbb2和vegf在大肠癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 应用免疫组化envision方法检测61例大肠癌组织中egfr、cerbb2及vegf的表达水平。以多重线性回归分析上述基因表达水平与临床病理特征的关系。结果 61例大肠癌中egfr、cerbb2和vegf的阳性表达率分别为49.2%（30/60）、73.8%（45/61）和70.5%（43/61）, 多因素分析显示它们分别与肿瘤大小，淋巴结、肝脏转移及dukes分期相关，而与病人的性别和年龄无关。结论 egfr、cerbb2及vegf可作为临床判定大肠癌恶性程度及评估预后的指标，对指导术后化疗或靶向治疗具有一定的意义。　　【关键词】 egfr cerbb2 vegf 大肠癌 免疫组化 　　大肠癌是消化道常见的恶性肿瘤之一,每年全世界约有50万人发病,在西方国家大肠癌死亡率仅次于肺癌和乳腺癌,居恶性肿瘤死亡率第3位；1990～1992年中国1/10人口死因抽样调查结果显示,中国大肠癌的年死亡率为5.30/10万,居恶性肿瘤死因第5位。根据患者的肿瘤大小、临床分期、淋巴结状态、肿瘤组织学分级等指标来判断病情发展及预后已得到广泛应用。但近年随分子生物学迅速发展，一些蛋白质分子生物标记应用于恶性肿瘤的预后判断[1]。本实验应用免疫组化方法检测大肠癌中egfr、cerbb2及vegf的表达，旨在进一步探讨它与大肠癌的临床病理特征的关系，为大肠癌的诊断、治疗及预后判断提供客观的参考指标。. 　　1 资料与方法 　　1.1 临床资料 　　收集上海市长征医院2002年12月～2003年12月的大肠癌手术标本61例，经10%中性福尔马林固定后，常规石蜡包埋切片。其中男34例，女27例，年龄26～83岁，平均年龄56.9岁。按dukes分期，a+b期20例，c+d期41例；有淋巴结转移23例，无淋巴结转移38例；有肝转移4例，无肝转移57例；高分化2例，中分化53例，低分化6例；肿瘤 　　大小≤5cm 40例，＞5cm 21例。 　　1.2 试剂 　　（1）鼠抗人cerbb2/her2/原癌基因蛋白单克隆抗体（上海长岛生物技术有限公司产品，产品编号：r0196；克隆号：e24001+3b5）; （2)抗人egfr单克隆抗体（福州迈新生物技术开发有限公司产品，产品编号：mab0196；克隆号：egfr/113）；（3）抗人vegf单克隆抗体（福州迈新生物技术开发有限公司产品，产品编号：mab0243；克隆号：jh121）。 　　1.3 方法及分级标准 　　采用免疫组化envision法。主要步骤：(1) llysine处理玻片;(2)连续石蜡切片4μm,60℃烘干1h;(3)常规脱蜡、水化组织切片；(4)预处理组织切片；(5)切片用蒸馏水洗1×3min，pbs洗2×3min;6.3% h2o2阻断内源性过氧化物酶，孵育10min；(7)pbs洗3×3min;(8)滴加第一抗体，置湿盒内4℃过夜；(9)pbs洗3×3min;(10)滴加envisiontm孵育30min；(11)tbs洗3×3min;(12)dab显色5～10min;(13)苏木精复染，常规脱水透明、中性树脂封片。 　　染色结果判定：细胞膜或胞浆呈淡棕色为1分，棕黄色2分，棕褐色3分；阳性细胞数≤25%为1分，26%～50%为2分，51%～74%为3分，≥75%为4分；染色的评分与阳性细胞数评分相加，0～1分（-），2～3分（+），4～5分（++），6～7分（+++）；最后得分以4～7分为高表达。 　　1．4 统计学方法 　　采用spss13.0统计分析软件，分别以cerbb2、egfr、vegf为应变量，以肿瘤大小、淋巴结转移、肝脏转移、dukes分期、性别、年龄为自变量进行多重线性回归分析。 　　2 结果 　　2.1 cerbb2、egfr、vegf在大肠癌中的表达 　　61例大肠癌中45例（73.8%）cerbb2阳性表达，其主要分布于上皮细胞膜，见图1；在恶性组织中呈阳性表达而临近的正常组织呈阴性表达，见图2；61例大肠癌中30例（49.2%）egfr阳性表达，其主要分布于上皮细胞膜，见图3；61例大肠癌中43例(70.5%)vegf阳性表达，其主要分布于上皮细胞的胞浆，见图4。 　　2.2 cerbb2、egfr、vegf的表达与大肠癌临床病理特征的关系 　　按α=0.10水准，在3种分析中性别、年龄被剔除，共引入肿瘤大小、淋巴结转移、肝脏转移、dukes分期等4个变量。各偏回归系数见表1。表1 4个自变量的偏回归系数值表用逐步回归法筛