色谱分析毛细管电泳选编.ppt

;;概述;;;萃取、沉淀、结晶 升华 蒸馏 过滤 降沉、离心 色谱 电泳 筛分;; 毛细管 数据处理 电极 检测器 电极 试样 缓冲液 缓冲液 高压电源 （可高至30KV） ;;基本概念;带电粒子在电场作用下于一定介质中所发生的定向运动 电泳淌度(μep):单位电场 (E)下的电泳速度(υ ) μep= υep /E μep = υep﹒ (L /V) = ( l / t )﹒(L /V) ;电渗流 electroosmotic flow, EOF pH 3时，石英毛细管内壁带负电荷，吸引溶液中的阳离子形成双电层，在电场作用下，溶剂化了的阳离子，带动溶剂一起向阴极迁移，便形成了电渗流 电渗淌度(μeo) μeo =υeo / E = l /( teo﹒E ) 电渗流速度 毛细管有效长度 电渗流流出时间 电场强度 ;;;;;填充柱气相色谱;-;;离子所带电荷↑ 解离度↑ 体积↓ 溶液的黏度↓ ;; 改变外加径向电场 改变缓冲液成分和浓度 改变缓冲液pH 加入添加剂 改变温度;分离效率 柱效可以用理论塔板数n表示 n = (μep+μeo) V /(2D) 理论塔板高度 H =L / n n = 5.54 (χ/ W?)2 χ为电泳图上从起点至电泳峰最大值之间的距离 W?为电泳峰的半高峰宽 ;分离度 电泳中两峰的分离度（Rs），也称为分辨率，它表示了淌度相近的组分分开的能力，可表达为 Rs= （n 1/2/4）×（ Δυ /υ平 ） Δυ:相邻两区带的迁移速度差 υ平:为两者的平均速度 Δυ/υ平:表示分离选择性 n:柱效 Rs = 2 (tm2 - tm1 ) / ( W1 + W2 ) tm1、tm2 分别为两个组份的迁移时间 W 为峰底的宽度?;影响分离效率的因素 ： 焦耳热 进样 电泳扩散 毛细管壁对组分的吸附;;;毛细管壁对组分的吸附 电泳峰拖尾或变形，甚至消失。 抑制吸附作用常用的方法有： 使用极端pH条件 加入中性盐或两性离子化合物 对毛细管内壁进行涂层处理 需要注意：方法也会抑制或改变电渗流 ;;;;;;电渗流的意义 电泳过程中，伴随着电渗现象 电渗流的速度比电泳速度快5－7倍 利用电渗流可将正、负离子或中性分子一起向同一方向，产生差速迁移，在一次电泳操作中同时完成正、负离子的分离分析 电渗流是毛细管电泳分离的重要参数，控制电渗流的大小和方向，可提高毛细管电泳分离的效率、重现性、分离度。 ;;μeo正比于Zeta电势和介质的介电常数 反比于介质的黏度 Zeta电势正比于双电层厚度和界面有效电荷密度，反比于介质的介电常数 改变外加径向电场 改变缓冲液成分和浓度 改变缓冲液pH 加入添加剂 改变温度; 区带宽度及其展宽因素;;