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亲和层析谱柱 一、定义 亲和层析：利用共价连接有特异 HYPERLINK /view/432007.htm \t _blank 配体的层析介质，分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白质或其他分子的 HYPERLINK /view/3025945.htm \t _blank 层析技术 二、原理分析 将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中，当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时，与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附，直接流出，从而与被分离的蛋白质分开，然后选用适当的洗脱液， 改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来，这种 HYPERLINK /view/329701.htm \t _blank 分离纯化蛋白质的方法称为亲和层析。 步骤：1、固定吸附剂放置在层析柱 2、与吸附剂具有亲和能力的蛋白质滞留在层析柱 3、用洗脱液将结合的蛋白质洗脱下来 亲和层析是一种吸附层析， HYPERLINK /view/20489.htm \t _blank 抗原（或抗体）和相应的抗体（或抗原）发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将抗原（或抗体）固相化后，就可以使存在液相中的相应抗体（或抗原）选择性地结合在固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分开，达到 HYPERLINK /view/3030258.htm \t _blank 分离提纯的目的。 在生物分子中有些分子的特定结构部位能够同其他分子相互识别并结合，如酶与 HYPERLINK /view/63162.htm \t _blank 底物的识别结合、受体与配体的识别结合、抗体与 HYPERLINK /view/20489.htm \t _blank 抗原的识别结合，这种结合既是特异的，又是可逆的， 改变条件可以使这种结合解除。生物分子间的这种结合能力称为亲和力。亲和层析就是根据这样的原理设计的蛋白质 HYPERLINK /view/329701.htm \t _blank 分离纯化方法。 此法具有高效、快速、简便等优点。 种类：  HYPERLINK /view/20489.htm \t _blank 抗原和相应的抗体发生特异性结合 酶与 HYPERLINK /view/63162.htm \t _blank 底物的识别结合 受体与配体的识别结合 三、载体要求 理想的载体应具有下列基本条件： 不溶于水，但高度亲水； 惰性物质，非特异性吸附少； 具有相当量的化学基团可供活化； 理化性质稳定； 机械性能好，具有一定的颗粒形式以保持一定的流速； 通透性好，最好为多孔的网状结构，使大分子能自由通过； 能抵抗微生物和醇的作用。 可以做为固相载体的有 HYPERLINK /view/4416908.htm \t _blank 皂土、 HYPERLINK /view/1921499.htm \t _blank 玻璃微球、石英微球、羟磷酸钙、 HYPERLINK /view/157830.htm \t _blank 氧化铝、 HYPERLINK /view/585364.htm \t _blank 聚丙烯酰胺凝胶、淀粉凝胶、 HYPERLINK /item/%E8%91%A1%E8%81%9A%E7%B3%96%E5%87%9D%E8%83%B6 \t _blank 葡聚糖凝胶、纤维素和 HYPERLINK /view/996306.htm \t _blank 琼脂糖。在这些载体中，皂土、玻璃微球等吸附能力弱，且不能防止非特异性吸附。纤维素的非特异性吸附强。聚丙烯酰胺凝胶是优良载体。 琼脂糖凝胶的优点是亲水性强，理化性质稳定，不受细菌和酶的作用，具有疏松的网状结构，在缓冲液离子浓度大于0.05Mol/L时，对蛋白质几乎没有非特异性吸附。琼脂糖凝胶极易被 HYPERLINK /view/439945.htm \t _blank 溴化氢活化，活化后性质稳定，能经受层析的各种条件，如0.1Mol/L NaOH或1Mol/L HCl处理2h~3h及 HYPERLINK /view/81898.htm \t _blank 蛋白质变性剂7Mol/L尿素或6Mol/L HYPERLINK /view/903824.htm \t _blank 盐酸胍处理，不引起性质改变，故易于再生和反复使用。 琼脂糖凝胶微球的商品名为Sepharose，含糖浓度为2%、4%、6%时分别称为2B、4B、6B。因为Sepharose 4B的结构比6B疏松，而 HYPERLINK /view/1168447.htm \t _bla