藏羚羊（AAC）n微卫星富集文库构建与引物筛选.pdfVIP

???? 年? 青 海师 范大 学 学报 ?自然科 学版 ?? ????? 第 ?期? ?????????????????????????????????????????????????????? ? ?．?? 藏 羚羊 ??????微 卫 星 富集 文 库构 建与 引 物筛 选? 徐 永 涛?，马 建 滨?，周 智 红?，谭 春敏?，张滑 泽?，郭松 长?，都 玉 蓉? ??．青海师范大学 生命与地理科学学院 ，青海 西宁 ??????’? ?．中 国科 学 院 高 原 生 物 适 应 与 进 化 重 点 实 验 室 ，青 海 西 宁 ???????? 摘 要 ：基于磁珠 富集法 ，利用 生物 素标记 的寡核 苷酸探针 ??????从 藏羚羊 ??????????????????基 因组 酶切的 ???— ??????片段? 中筛选微 卫星位 点，纯化的富集片段连接到 ?????．?载体和转化到 ???????感受态 细胞．随机挑取 ???个 白斑克隆 ，???检测到? 条带数大于或等 于 ?的阳性克隆为 ??个 ，阳性率 为 ??．?? ．对 阳性 克隆测序 ，获得 ??条含微卫星座位的序列 ，微卫星重复次数在? ?～??次之 间．舍弃不适宜设计 引物 的微卫 星座位 ，试 验设 计并合成了 ??对 微卫星引物?以 ?个样点 ?青海 、新疆 、西藏?的 ??个藏? 羚羊基 因组 为模板进行 ???扩增 ，获得 ?对可得到稳定扩增产物 的微卫星引物 ，其 中 ?对 引物 的扩增产物具 有多态性 ，座位分别? 为 ??????、??????、??????和 ??????．上述 引物可用 于藏羚 羊及 近缘物种 的遗传多样性 、种群遗传结构等研究．? 关键词 ：藏羚羊 ；微卫 星；富集文库 ；??????探针 ；引物筛选? 中 圈分 类 号 ：????? 文 献 标 识 码 ：?? 文 章 编 号 ：????— ????????????— ????— ??? 藏羚羊 ??????????????????又名 藏 羚 、独 角 羊 ，隶 属 偶 蹄 目??????????????，牛科 ?????????，藏羚 属 ????—? ????????，系青 藏高原 特 有种 ，国家一 级保 护 动物 ，世界 濒危 野 生动 物物 种 ，也 是青 藏 高 原动 物 区 系的典 型 代? 表 种 和生态 系 统 的重要 指示 物 种 ?武 素 功等 ，?????．? 微 卫 星 ??????????????，???，又称 为简单 序列 重 复 ????????????????????????，????或短 串联 重复 序 列? ?????????????????????，????，是 由 ?～?个碱 基 组成 的 串联 重 复序 列 ，包 括核 心序 列和 高度保 守 的侧翼 序? 列 ．它 具有 按 照孟 德尔 方式 分离 、多态信 息含 量 丰 富 、呈 共显 性 遗传 等 特 点 ，已广 泛 用 于 品种 鉴 定 、种群 多 样? 性 分 析 以及 遗 传连 锁 图谱 构建 等领 域．? 本 研究 利 用磁 珠 富集法 ，采 用 三碱基 重 复 的探针 ??????杂 交转 化 分 离微 卫 星 ，进 而筛选 出具有 多 态 性? 的引 物 以期 为 藏羚 羊 的遗传 多 样性 研究 ，群 体遗 传结 构分 析 ，种质 资源