体内药物分析分析方法.pptxVIP

第二篇 分析方法 第五章 光谱分析法 第一节 比色法 1）定义 紫外-可见光通过某种物质时，一部分光被吸收，从而引起该物质分子的外层电子能级跃迁。利用被测物质在特定波长或一定波长范围内的吸收度来测定药物的含量。又称吸收光度法。 2）定量方法 A:λ范围400-760nm可见。定量依据 A=E·C·L B:是用于待测物本身有颜色或能与显色剂作用显色的被测组分，体内药物分析易受内源性杂质干扰。; C:生物样品采用标准曲线法 D:检测灵敏度低，大于1μg/ml的生物样本；选择性差，代谢 物和内源性物质干扰测定 第二节 紫外分光光度法 一.概述 A:λ范围200-400nm可见。定量依据 A=E·C·L B:是用于有紫外吸收的药物，灵敏度略高于比色法 C:需经样品的萃取、纯化才能得到好的分析效果 二.方法与应用 1.直接紫外分光光度法 A:样品中的杂质在测定λ处无干扰 B:生物样品中待测物的浓度较高，达到检测限; 2.差示分光光度法 1）基本原理 简称△A法 在两种不同的环境中，待测物以不同的分子形式存在，其吸收光谱有明显的区别。而共存的物质不受这种环境变化影响，吸收光谱无变化。 2）测定方法 A:两份相同的共试品溶液，经过不同的处理后，一份置于样品池中，一份置于参比池中测其差值（△A） B:波长λ的选择，差示法 C:数学依据 D:必须通过试验证明生物样本中的干扰物被消除，△A杂质=0; 3.双波长分光光度法 1）基本原理 吸收光谱部分重叠的a、b两组分混合物中，若消除b的干扰 测定a，可从b的吸收光谱上选择两个吸收度相等的波长λ1 和λ2。测定混合物在两波长处吸收度的差。 2）测定波长和参比波长的选择 A:选择方法 B:数学依据 C:干扰组分在两个波长处有相同的吸收度△Ab= △Abλ1- △Abλ2=0 D:待测物在两个波长处的吸收度差值△Aa足够大; 第三节 荧光分析法 一.概述 A:是利用物质发射荧光的特性进行分析的光学分析法。 B:荧光分析的特点 灵敏度高；选择性好 二.基本原理 1.荧光的发生 2.分子结构与荧光的关系 能够发射荧光的物质具备：必须有强的紫外-可见光吸收； 一定的荧光效率 1）荧光效率（φf） 表示物质发射荧光能力大小 2）分子结构与荧光特性 A:共轭结构; B:分子的取代基 -OH、-OR、-NH2、-CN等荧光增强；-COOH、 NO2、-C=O、-NO等荧光减弱；-R、-SO3H等荧光不变。 3.激发光谱和荧光光谱 1）激发光谱 是指激发光的波长与发射荧光强度的关系曲线 2）荧光光谱 是指荧光波长与发射光强度的关系曲线 4.激发波长λex和荧光波长λem选择 1）根据激发光谱和荧光光谱选择λex和λem 2）λex和λem的距离≥20-30，理想的为50 3）若激发波长有几个强度适宜的峰，选择波长最长峰 5.荧光强度与物质浓度的关系 A:物质发射荧光的强度 F=2.3kφfI0ECL; B:F=KC 前提是ECL≤0.05，故荧光分析法为稀溶液分析法 6.定量分析方法 1）标准曲线法 2）比例法 A:如标准曲线通过原点，可选择线性范围内，用比例法测定 B:方法 取已知量的标准品，配制一标准液（Cs），Cs在线性范围内。在相同条件下测定荧光强度（Fs、Fx），计算试样浓度（Cx） 7.影响荧光强度的因素 温度；溶剂；pH；荧光淬灭剂；激发光照射；散射光等 三.方法与应用 1.常规方法; 1）直接测定法 用于自身能产生荧光物质 2）间接法 无荧光或荧光弱的药物，与荧光试剂反应产生荧光 2.胶束增溶增敏荧光分析法 1）胶束溶液为一定浓度的表面活性剂，有一个亲水基团和一个疏水基团，极性溶液中几十个分子聚集成团，内疏水，外亲水 2）一定浓度下（临界浓度）形成胶束，直径为3-6nm 3）极性小的难溶溶水的荧光物在胶束液中溶解度显著增加 温度；溶剂；pH；荧光淬灭剂；激发光照射；散射光等 4）胶束溶液对荧光物质有增溶、增稳、增敏等特点; 3.荧光探针法 1）基本原理 许多药物本身无荧光，从无荧光到有荧光需要使用荧光探针 2）荧光探针的优点 A:经衍生化后增加响应值，提高灵敏度和选择性 B:有稳定分析物的作用，活泼、挥发性药物 C:有助于化学基团的确定 4.荧光淬灭法; 第四节 原子吸收分光光度法 原子吸收光谱法是基于蒸汽相中被测元素的基态原子对其原子共振辐射的吸收