05动物胚胎移植技术和体外受精.pptVIP

第五章动物胚胎工程技术及体外受精 ;现代生物技术;试管婴儿;第一节 胚胎工程技术 胚胎移植 胚胎融合 胚胎分割 胚胎的冷冻保存 早期胚胎培养 胚细胞核移植;受精过程 ①分解放射冠的卵泡细胞 ②水解局部透明带 ③ 精子细胞核和部分胞质进入卵母细胞;卵裂及胚泡形成（第一周） 卵裂(cleavage) 受精卵由输卵管向子宫方向运行，并不断进行细胞分裂，受精卵早期的细胞分裂称卵裂；卵裂产生的子细胞呈球形，称卵裂球（blastomere）;胚泡形成 受精后第4~6天桑椹胚细胞继续分裂，细胞间开始出现小腔隙，并逐渐汇合成一个大腔，桑椹胚转变为中空的泡状，称胚泡（blastocyst），胚泡由三部分组成： 胚泡 ;一、胚胎移植;初始阶段 1890-1900 W.Heape将安哥拉兔和荷兰兔的受精卵分别移植到比利时兔的输卵管内，分别获得仔兔2只 1900-1950 主要由英美科学家在家兔、绵羊、山羊小家畜方面研究，成功率35%左右 发展阶段 1950-1970 日本首次在牛胚胎移植上成功，之后日、美采用非手术法移植成功，胚胎移植成功率达70-80%;实用化初始阶段 1970-1980 加美开始成立牛胚胎移植公司，1973年牛冻胚移植成功（英） 实用化研究阶段 1982- 大规模胚胎移植、核移植、嵌合体、胚胎分割、性别鉴定、体外受精在英美日德广泛开展，克隆羊诞生;1.胚胎移植的生理学基础;2. 胚胎移植的基本原则;3、胚胎移植;1）供受体的选择与管理;受体的选择 身体健康，身体状况中上的适繁未孕个体，无生殖道疾病和难产病史 繁殖状况正常，有正常的发情周期 母性良好：泌乳性能、护仔性能 供、受体的管理 防疫、记录 饲养管理等; 2）同期发情（synchronization of eatrus） 采用激素或类激素的药物处理，使这一群母畜在特定时间内集中发情和排卵 即将母畜的黄体期延长或缩短，使母畜摆脱内、外孕激素对卵巢的控制，在同一时间内引起全部母畜的卵泡发育，从而达到同期发情的目的;延长黄体期：孕激素 控制卵泡的生长发育和发情表现 缩短黄体期：前列腺素 加速黄体退化，使卵巢提前摆脱体内孕激素的控制 促进卵泡发育、排卵：促性腺激素 ;3）超数排卵;个体对超排处理的反应效果难以预测 产生不良的后果：胚胎死亡 卵母细胞蛋白质合成过程发生改变 生殖道机能产生影响 ;4）胚胎回收;;胚胎质量评价：;6）胚胎的保存;胚胎冷冻的原理;受精卵移植 一般供体为良种或优良个体，而受体为生产性能较差的个体或品种。 “借劣质动物之腹怀优秀个体之胎”;选择; 8)胚胎移植的应用范围;在家畜改良方面的应用;在特定品种扩繁上的应用;在动物生物多样性上的应用;其它方面应用;二、胚胎分割技术;选择良好的桑椹胚或囊胚移入培养皿中，用分割针或分割刀片将其切开，吸出其中的半个胚胎注入透明带中或直接移植给受体;;3）胚胎分割的理论依据;4）特点: 后代具有相同的遗传物质 胚胎克隆 5）使用的主要仪器： 实体显微镜和显微操作仪 6）应用: 为转基因技术、性别控制技术提供活胚材料 ;注意： ①对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要将内细胞团均等分割 原因：内细胞团一般到囊胚阶段才出现，它是发育为胚胎本身的基础细胞，其他细胞为滋养细胞，只为胚胎和胎儿发育提供营养。若分割时不能将内细胞团均等分割，会出现含内细胞团多的部分正常发育的能力强，少的部分发育受阻或发育不良，甚至不能发育等问题;②胚胎分割技术也是动物克隆的方法之一 ;④透明带对于分割胚体内外发育的影响 透明带作用：阻止异种动物精子受精和同种动物的多精子受精，保护受精卵在输卵管和子宫内正常运行，防止输卵管和子宫液的伤害及白细胞的吞噬，并使分裂阶段的卵裂球相互靠近，不致分离 胚胎分割时所处的发育阶段，对透明带的依赖性越强 ;⑤冷冻胚胎的影响 分割过程引起的透明带损伤和胚胎细胞数量减少，经冷冻和解冻在体内和体外的发育能力进一步降低，其移植妊娠率低于完整的冷冻胚胎;三、胚胎嵌合体;1、方法;聚合法 全胚聚合法 将发育到一定时期的胚胎，去掉透明带后，将两个或两个以上的胚胎聚合在一起，形成一个胚胎后放入二氧化碳培养箱中培养至囊胚，再植入受体动物体子宫内 卵裂球聚合法 去掉透明带后将胚胎打散，从双方胚胎卵裂球中各取出一部分细胞进行聚合，培养后移植;2、影响因素; 四、胚胎细胞核移植 将未着床的早期胚胎分散成单个的细胞，用电融合方法，使单个细胞与去除细胞核的未受精的成熟的卵母细胞融合，体外培养发育成胚胎后，移入受体妊娠产子 已在小鼠、兔、山羊、牛、猴等动物上成