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　　蒲薏颗粒药效学实验研究的论文 作者：迟明艳 黄勇 王爱民 兰燕宇 王永林 【摘要】 目的对蒲薏颗粒进行药效学研究。方法观察蒲薏颗粒对荷瘤(h22)小鼠增效减毒作用，对艾氏腹水癌(eac)小鼠生命延长率的影响，对体外培养人食管癌(eca-109)细胞的影响，对荷瘤小鼠免疫功能的影响。结果蒲薏颗粒能增强化疗药物抑瘤作用、拮抗化疗药物对小鼠，雄性，体重18～22 g;sd大鼠，雄性，体重180～210 g，均由贵阳医学院实验动物中心提供，动物合格证号：scxk(黔)2002-0001。balb/c小鼠(spf级)，雄性，体重16～20 g，简阳市简城比尔动物养殖场提供，动物合格证号：0011159。.cOm 　　1.2 瘤株 小鼠肝癌h22：由华西医科大学肿瘤研究所提供;艾氏腹水癌(eac)细胞，由重庆医科大学生物工程系超声研究所提供。人食管癌细胞(eca-109)：由中科院生命科学研究所提供。 　　1.3 药物 蒲薏颗粒(py)由贵州渝生制药有限公司提供，每克颗粒含4g生药，批号环磷酰胺(ctx)，上海华联制药有限公司生产，批号：031001;5-氟尿嘧啶(5-fu)，上海旭东海普药业有限公司生产，批号：030405;噻唑蓝(mtt)：sigma公司出品，批号：206-069-5。 2 方法与结果 　　2.1 蒲薏颗粒对小鼠肝癌h22化疗的增效减毒作用[1～3]在无菌条件下于小鼠右腋皮下接种2×107/ml的h22细胞悬液，0.2 ml/只，24 h后按体重随机分为模型对照组，5-fu组，py高、低剂量组，5-fu加py高剂量组，5-fu加py低剂量组。各组小鼠按表1的剂量灌胃(ig)给药，1次/d，连续10 d，模型对照组给予等量生理盐水(ns)。停药次日称重后，摘眼球取血作外周血象检查，脱颈椎处死动物，剖取并称重瘤块，计算抑瘤率。剥离小鼠右股骨，用1640培养液通过针头反复冲洗骨髓并测定洗液中骨髓有核细胞数。见表1。 　　肿瘤抑制率(%)=(1-实验组平均瘤重对照组平均瘤重)×100% 　　由表1结果可见，蒲薏颗粒与5-fu合用，可使5-fu的肿瘤抑制率明显提高;白细胞、骨髓有核细胞计数也有显著性差异(plt;0.05或plt;0.01);提示蒲薏颗粒具有增效减毒的作用。表1 对小鼠肝癌h22化疗的增效减毒作用与模型对照组比较，*plt;0.05，**plt;0.01;与5-fu组比较，#plt;0.05，##plt;0.01;n=10 　　2.2 蒲薏颗粒对艾氏腹水癌(eac)小鼠生命延长率的影响 [4～5]于无菌条件下小鼠腹腔常规接种艾氏腹水癌小鼠(1×108/ml)的细胞悬液，瘤液0.2 ml/只，接种后24 h，按体重随机分为5组：模型对照组，ctx组(20 mg/kg)，py高、中、低剂量组，各组小鼠按表2的剂量ig给药，1次/d，连续10 d，模型对照组给予等量ns。记录存活天数，计算生命延长率，比较各组间差异。结果见表2。 　　生命延长率(%)=给药组平均生存时间-对照组平均生存时间对照组平均生存时间×100%表2 蒲薏颗粒对艾氏腹水癌(eac)小鼠生命延长率的影响由表2结果可见，蒲薏颗粒高、中、低剂量组eac荷瘤小鼠生存时间与模型对照组比较均有显著差异,生命延长率最高达50%以上,表明该药对艾氏腹水癌小鼠生存时间有明显的延长作用。 　　2.3 对体外培养人食管癌(eca-109)细胞的影响[1]取大鼠30只，随机分为对照组(ns 10 ml/kg)、环磷酰胺组 (20 mg/kg)、蒲薏颗粒组(12 g/kg)。各组动物分别ig给药，1次/d，连续7 d。末次ig后2 h乙醚麻醉，无菌条件下股动脉取血，4℃ 2 500 r/min离心25 min，吸取血清，同组血清混匀，以0.22 μm微孔滤膜正压过滤除菌，各组保留部分全血清，其余血清用1 640分别配成含鼠血清60%，30%，15%的培养基，-40℃保存备用。 　　取在对数生长期的人食管癌细胞标准株(eca-109)，用胰酶消化后，稀释成 1×105个/ml，台盼蓝染色，检测活细胞达95%以上。分别将肿瘤细胞接种于96孔板，每孔100 μl，培养24 h后，观察细胞贴壁后，分别换成含不同浓度大鼠血清培养基，每组10个平行孔。培养24 h，每孔内加入5 mg/ml mtt10 μl，继续培养4 h，弃去培养孔内培养基，每孔加入二甲基亚砜100 μl，待蓝色结晶完全溶解后，用酶标仪(波长490 nm)测定各孔吸光度(a)。见表3。 　　细胞毒活性(%)=(1-实验组od值对照组od值)×100%　表3 含药血清对eca-109细胞的细胞毒活性与相应浓度对照组鼠血清比较,*plt;0.05，**plt;0.01;n=10 　　与相