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GeneCopoeiaTM Expressway to Discovery Luc-Pair ? Duo-Luciferase HS Assay Kit - 高灵敏性双荧光素酶检测试剂盒 Cat. No. LF004 (100 reactions) Cat. No. LF005 (300 reactions) Cat. No. LF006 (1000 reactions) 使用说明书 GeneCopoeia, Inc. 广州易锦生物技术有限公司 9620 Medical Center Drive, #101 地址：广州科学城揽月路 3 号 F 区 F 801（510663） Rockville, MD 20850 电话： 4006-020-200、 020 020 USA 网站： 301-762-0888 866-360-9531 inquiry@ ? 2016 GeneCopoeia, Inc. Luc-Pair? Duo-Luciferase HS Assay Kit 使用说明书 使用说明书 Luc-Pair? Duo-Luciferase HS Assay Kit I. 产品概述 II. 产品信息及储存条件 III. 细胞裂解 IV. FLuc 和 RLuc 工作液的配制 V. 荧光素酶检测流程 VI. 有限使用许可及质保声明 I. 产品概述 对报告基因表达的转录调控的研究常被应用于生物学研究和药物发现。荧光素酶在基因表达研究中应用最为广泛，其主要包含以下 几个优点： 1) 在广泛动态范围内具有高灵敏度 2) 在哺乳动物细胞内无荧光素酶、 背景极低 3) 实验重复性好 4) 成本低 5) 操作简单 萤火虫和海肾荧光素酶都具有快捷、简便、灵敏度高的检测特点，被公认为是理想的报告基因，因为它们具有完全不同的进化起源、 酶学结构和底物要求。萤光素酶报告基因的测定需要用光度计或多功能微孔板检测仪，且发光强度与荧光素酶的数量成正比。 萤火虫荧光素酶（Photinus pyralis）已被证实是检测启动子活性和监测基因转录后调控状态的理想的报告基因。它是在细胞质中作 用的酶，分子量为 61 kDa 并催化下列反应： 2 Luc-Pair? Duo-Luciferase HS Assay Kit 使用说明书 海肾（Renilla reniformis）荧光素酶是一个 36 kDa 单亚基蛋白质，酶活性不需要翻译后修饰，因此它可以作为一个实时转录报告 基因，催化下面的生物发光反应： 此体系可以在目的基因的附近监控顺式作用元件的转录激活。然而，它很难通过基因 3’UTR 调节来测定转录抑制效率，因为酶底 物的活性非常低。在测定底物抑制物时，酶底物复合物的稳定性有更大的灵活性。由于生物学变异和其它原因的干扰，使观察到的荧光 素酶活性差异变小，所以在标准实验流程中通常会选择一个报告基因作为内对照，使另一个报告基因的检测均一化。标准实验流程也需 要调整转染效率和细胞活性之间的差异。 GeneCopoeia 对萤火虫和海肾荧光素酶的酶结构和底物进行优化并研发出一个方便的双荧光素酶报告基因检测方法，即对同一样 品中的两个荧光素酶同时测定。将裂解产物与第一种荧光素酶测试试剂混合，测试萤火虫荧光素酶的活性；然后加入