真菌多糖生理活性、研究技术.pptVIP

桑黄子实体多糖的分离纯化工艺及生物活性研究;主要内容;继基因组学、蛋白质组学之后，糖类研究成为21世纪巨大的科学前沿。药物糖与功能糖、用糖进行能源/资源开发等正成为我国经济的增长点。 糖工程共性关键技术主要围绕糖制备技术，以及糖分离、分析和功能评价技术展开。包含各种各样天然多糖制备、多糖降解与分离、寡糖化学-酶合成、糖化学-酶法转化等技术。;2001年Science（Vol.291）43篇论文涉及糖的研究。2007年Nature（Vol.26）7篇论文综述糖化学糖生物学研究进展。发达国家在糖研究上不惜斥巨资建立各种平台，展开糖生物学、化学糖生物学、糖组学、糖芯片、糖工程、糖药物等领域的研发。 ;真菌多糖： 1、一类天然高分子化合物，它广泛存在于真菌的细胞壁中，是由醛基和酮基通过糖苷键连接起来的高分子聚合物。 2、有螺旋状的三维立体结构，其构型近似于DNA，是一种β型的多糖。 3、是控制细胞分裂分化，调节细胞生长衰老的一类活性多糖。 4、其进入体内后不会被消化、分解、吸收，能够和细胞膜上的受体结合，从而能发生药理活性。因此，是一类具有广泛药理活性的功效十分显著的活性物质。;真菌多糖分类：一般分为胞外多糖和胞内多糖； 高等真菌多糖主要是胞内多糖，它主要存在于菌丝体的细胞壁或细胞间质中，通过普通粉碎不能提高其含量的是胞外多糖，反之则是胞内多糖。 ;真菌多糖主要分布于真菌的菌丝、子实体及其发酵液中。在不同的部位含量有所不同，在真菌的菌丝体的细胞壁和细胞质中存在较多，其他地方较少。故真菌多糖主要是在菌丝体细胞壁和细胞质中提取。 ;真菌多糖具有降血压、血脂、健胃保肝、抗氧化、延缓衰老、抗感染、抗辐射、促进核酸和蛋白质的生物合成，修复损伤的组织细胞等多种功效。 真菌多糖的抗肿瘤作用是目前所知其最为重要的生物活性，也是研究最为活跃的部分。 ;桑黄多糖的概述;桑黄多糖的提取;目前，提取多糖常用的方法有不同温度下的水提法、稀酸提法和冷热稀碱提法。其中水提法被采用得较多，适合于提取水溶性多糖；稀酸提取法适用于提取酸溶性多糖，提取时间宜短、温度不超过50 ℃，以防止糖苷键断裂；稀碱法适合于提取碱溶性糖。;大部分多糖在有机溶剂中的溶解度极小，所以可用有机溶剂来沉淀。常用4-5倍的低级醇和丙酮，一般在pH 值为7.0左右沉淀，制得粗多糖。由于水提时间长且效率低，酸碱提取易破坏多糖的立体结构及活性，而采用酶法提取真菌多糖（用复合酶与热水浸提相结合的方法），具有条件温和、杂质易除及提取率高等优点。; 超声技术提取 超声波作为一种提取技术已有报道，它具有时间短、效率高、提取量高等特点，同时可防止提取物在长时间、高温条件下发生降解、褪色等变化。 ;超声波协同纤维素酶提取多糖的方法，通过空化、振荡等作用，使酶分子构象及催化部位微环境发生变化，从而影响纤维素酶的催化活力。此外，低强度超声不仅可使细胞周围形成微流，还可使动植物细胞产生胞内环流，从而提高了细胞膜和细胞壁的通透性，利用这一特点可达到加快细胞壁释放多糖的速度、缩短提取时间、提高多糖提取率的目的。; 微波法提取 微波技术是近几年来用于天然植物有效成分提取的一项新技术，它具有快速、高效、安全、有效成分得率高、节能等特点。 据报道有人采用微波技术应用于板蓝根多糖的提取，结果表明，粗多糖得率和多糖质量分数均明显高于单独使用水煎煮法。;多糖的纯化是将粗多糖混合物分离为单一的纯多糖的过程。 在多糖提取物中，常会有无机盐、蛋白质、色素及小分子物质等杂质，必须分别除去．一般是先脱除非多糖组分，再对多糖组分进行分级。 ;纯化方法 （1）按溶解性不同分离：分步沉淀法、盐析法 （2）按电离性质不同分离：季胺盐沉淀法 （3）柱层析法：凝胶柱层析法、纤维素阴离子交换剂柱层析法、活性炭柱层析法、离子交换柱层析和普通凝胶柱层析联用法、三种层析柱联用。;蛋白质一般常用醇析法和Sevag法、三氟二氯乙烷法等除去； 色素大多呈负性离子，不能用活性炭吸收剂脱色，可用DEAE-纤维素或DuoliteA-T来吸附色素； 低聚糖等小分子杂质可通过逆向流水透析法除去，然后可通过分部沉淀法、柱层析法、超过滤法等方法进行纯化。;多糖制备过程中蛋白质的脱除是目前分离纯化多糖的难点。 Sevag法需要消耗大量的有机溶剂，且操作烦琐； 三氟三氯乙烷的沸点较低(bp56℃)易挥发，不宜大量应用； 三氯乙酸可引起多糖的降解，从而影响其生理活性； 酶价格昂贵，不适合工业化生产。 可以借鉴其它蛋白质脱除的方法，例如用天然澄清剂能简化提取工艺，提高多糖纯度。;脱色也是多糖提取纯化过程中面临的一个难题。 活性炭会吸附多糖而造成多糖的损失； H2O2氧化脱色容易引起有些多糖的降解。 可探索将粗多糖反复溶解与醇析，这可能是多糖脱色的可行方法。 从总多糖中分离单一多糖组分时