五田保肝液对酒精性肝病大鼠肝细胞凋亡的影响机制的论文.docVIP

　　五田保肝液对酒精性肝病大鼠肝细胞凋亡的影响机制的论文 五田保肝液对酒精性肝病大鼠肝细胞凋亡的影响机制 【关键词】 五田保肝液;酒精性肝病;肿瘤坏死因子α;caspase3 【摘要】 目的 探讨五田保肝液对酒精性肝病大鼠肝细胞凋亡和肝组织肿瘤坏死因子(tnf)α、caspase3 mrna表达的影响。方法 将100只rna的表达。结果 五田保肝液可降低酒精性肝病大鼠肝细胞的凋亡指数(ai)和肝组织tnfα、caspase3 mrna的表达，且以中、高剂量效果更加显著; tnfα、caspase3 mrna的表达与ai呈正相关(r=0.803,r=0.795,plt;0.01)。 结论 五田保肝液尤其是中、高剂量对大鼠酒精性肝病肝细胞凋亡具有抑制作用，其机制可能与降低tnfα、caspase3 mrna的表达有关。 【关键词】 五田保肝液;酒精性肝病;肿瘤坏死因子α;caspase3 长期大量酒精摄入可导致酒精性肝病(alcoholic liver disease，ald)的发生。.然而ald的发病机制仍??完全阐明，近年来研究认为酒精诱发的肝细胞凋亡在ald的发生发展中起着十分重要的作用。本文经过长时间临床验证，有确切防治ald疗效的专利制剂“五田保肝液”(专利号3)作为研究对象，探讨其对ald大鼠肝细胞凋亡的干预作用及分子机制，为防治ald提供实验指导和理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　g/片;62度牛栏山二锅头：由北京顺鑫农业股份有限公司生产;吡唑：购自上海晶纯试剂有限公司;玉米油：购于中粮食品营销有限公司;in situ cell death detection kit试剂盒购于美国roche公司;rna提取试剂盒rnasolv reagent购自omega公司;sybr primescript tm rtpcr kit试剂盒购自takara公司。 　　1.3 方法 　　1.3.1 实验分组和模型制备 　　大鼠适应性饲养1 组)、五田保肝液低剂量组(组、l·kg-1·d-1)、玉米油(2 ml·kg-1·d-1)、吡唑(25 mg·kg-1·d-1)混合物灌胃,2次/d,早晚各1次。组大鼠于早晚两次灌胃之间分别给予相当于成人等剂量的易善复(0.12 g·kg-1·d-1)和相应剂量的生理盐水灌胃，n组则3次/d以生理盐水灌胃。各组大鼠实验期间均予全价营养颗粒饲料喂养，自由进食饮水。造模时间为12 rna的表达 　　引物的设计与合成：tnfα引物序列：正义链：5′aagttcccaaatgggctccct3′;反义链：5′ctgctcctctgcttggtggttt3′;caspase3引物序列：正义链5′cagacagtggaactgacgat3′;反义链：5′tttcagcatggcgcaaagtg3′;以gapdh为内参，其引物序列为：正义链：5′cccccaatgtatccgttgtg3′;反义链：5′tagcccaggatgccctttagt3′。总rna的提取和检测：按rnasolv reagent的操作说明书提取大鼠肝组织总rna，紫外分析及琼脂糖电泳检测总rna的纯度、浓度及完整性。进行逆转录pcr反应。反应结束后,使用7300 system sds soft组相比ai下降明显(plt;0.01)，而组相比ai无显著性差异(pgt;0.05)。见表1。 　　2.3 对ald大鼠肝组织tnfα、caspase3 mrna表达的影响 　　m组tnfα、caspase3 mrna的表达明显高于n组(plt;0.01)，而五田保肝液各剂量组和y组tnfα、caspase3 mrna的表达明显低于m组(plt;0.01)，mi组tnfα、caspase3 mrna的表达和y组caspase3 mrna与n组相比，有所升高，差别具有显著性(plt;0.05)。见表1。表1 五田保肝液对ald大鼠肝细胞ai、肝组织tnfα、caspase3 mrna表达的影响 　　2.4 ald大鼠肝组织tnfα、caspase3 mrna表达与肝细胞ai的相关性分析 　　tnfα、 caspase3 mrna的表达与ai呈正相关(r=0.803，r=0.795，plt;0.01)。 　　3 讨 论 　　细胞凋亡是一种不同于坏死的细胞死亡方式，是细胞在基因的指导下“主动自杀”的过程。凋亡是ald过程中肝细胞死亡的重要方式〔1～3〕。肝细胞凋亡的程度与ald病情有明显的相关性〔4〕,所以试图阐明ald肝细胞凋亡的机制，可能为ald的防治提供新的思路和靶点〔5〕。 　　酒精及其代谢产物可激活肝的kupffer细