丹酚酸B对离体培养内皮祖细胞VEGF、bFGF mRNA表达及抗氧化酶活性的影响的论文.docVIP

　　丹酚酸B对离体培养内皮祖细胞VEGF、bFGF mRNA表达及抗氧化酶活性的影响的论文 丹酚酸b对离体培养内皮祖细胞vegf、bfgf mrna表达及抗氧化酶活性的影响 【关键词】 丹酚酸b;内皮祖细胞;细胞因子;抗氧化酶 【摘要】 目的 探讨中药单体丹酚酸b对离体培养内皮祖细胞(epcs)细胞因子mrna表达及抗氧化酶活性的影响。方法 密度梯度离心法和贴壁筛选法培养、纯化epcs，免疫细胞化学法鉴定。选择丹酚酸b最佳药物浓度干预的epcs，采用实时荧光定量pcr(rtpcr)检测细胞vegf,bfgf mrna表达，测定细胞培养液抗氧化酶sod,gshpx的活性。结果 丹酚酸b组vegf，bfgf mrna的表达量增加，与对照组比较差异具有统计学意义(plt;0.05)。丹酚酸b组细胞培养液中sod活性增强，与对照组比较差异具有统计学意义(plt;0.05);gshpx活性有增强趋势，但与对照组比较差异无显著性(pgt;0.05)。 结论 丹酚酸b对epcs具有保护作用，增强其细胞功能的部分机制与其增强分泌细胞因子vegf和bfgf mrna的表达，并且促进细胞释放sod、gshpx，清除自由基能力增强有关。 【关键词】 丹酚酸b;内皮祖细胞;细胞因子;抗氧化酶 　【abstract】 objective to explore the effects of traditional chinese medicine monomer sal b on cytokine mrna expression and activity of antioxidant enzymes of endothelial progenitor cells (epcs) in vitro. methods cultivation and purification of epcs in vitro ethod，and identified by immunocytochemistry. epcs rna es sod, gshpx activity of cell culture fluid rna expression of sal b group echanism is that enhances the expressions of vegf,bfgf mrna, promotes the cells to release sod, gshpx, and enhances the scavenging capacity of free radical. 　　【key es 　　内皮祖细胞(epcs)是血管内皮的前体细胞，参与成体血管新生，是治疗缺血性疾病和改善微环境的良好种子细胞，具有广阔的应用前景〔1〕。.前期研究显示活血化瘀中药丹参的主要水溶性成分丹酚酸b(sal b)对epcs具有保护作用，增强其细胞功能〔2〕。本文从细胞因子血管内皮生长因子(vegf)和碱性成纤维细胞生长因子(bfgf)mrna表达和抗氧化酶超氧化物歧化酶(sod)、谷胱甘肽过氧化物酶(gshpx)入手，观察sal b对离体培养epcs细胞因子mrna表达及抗氧化酶活性的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　em;特级胎牛血清;vegf，bfgf，纤维连接蛋白(rd);大鼠单个核细胞分离液(天津灏洋生物);cd34兔多克隆抗体，cd133兔多克隆抗体;sal b(天津天士力现代中药资源有限公司，批。免疫细胞试剂盒(天津灏阳生物)，二氨基联苯胺(dab)(sigma公司);二苯基四氮唑溴盐(mtt)(联星生物)，taqman reverse transcription reagents和sybr green pcr master mix reagent kits试剂盒(applied biosystems)，trizol总rna提取试剂(天津润泰科技发展有限公司);sod、gshpx生化试剂盒(南京建成生物工程研究所)。 　　co2恒温培养箱(model tc2323 co2 incubator);倒置相差显微镜(xd101 98010)，超净化工作台(hitachi)，台式高速低温离心机(hermlez323k美国)， uv530紫外分光光度计(上海生物仪器厂)，pcr仪(美国hybaid)，abi7300实时定量pcr仪，细胞培养管(ep管);半自动生化仪(rt9200，成都贝斯达仪器有限公司);hh6数显恒温水浴锅;离心机(ldz52);酶标仪(美国biorad);无菌手术器械;磁力搅拌器;电子天平(bs1101s 德国)。 　　1.3 方法 　　1.3.1 epcs培养与鉴定 　　采用贴壁筛选和密度