第二章 细胞培养的设备和操作技术 2.pptVIP

第二章 细胞培养的设备和操作技术;一、 实验室的设计 ; 细胞工程实验室它必须满足三个基本的需要，即： ?实验准备（培养基配制，洗涤与灭菌）； ?无菌操作； ?控制培养。;从总体上来分，实验室主要分为两类： ?基本实验室： ?辅助实验室：;1、基本实验室： ?准备室 ?接种室 ?培养室;? 作用 植物细胞和组织培养所需器具的洗涤、干燥和保存；培养基的配制、分装和灭菌；化学试剂的配制；重蒸馏水的生产等。 ? 设计要求 面积20m2左右。通风透光，地面防滑，墙面防潮。;▲ 实验台架 ▲ 大、小水槽 ▲ 烘箱 ▲ 冰箱 ▲ 天平系列 ▲ pH计 ▲ 高压消毒锅 ▲ 各种玻璃器皿 ▲ 药品柜 ▲（磁力）搅拌器 ▲ 电炉 ▲ 蒸馏水器;其中：玻璃器皿包括三角瓶、试管、培养瓶、培养皿、烧杯、量筒、移液管等 ▲移液枪（根据条件需要）由枪和枪头组成 ▲其他：锅、微波炉等;磁力搅拌器;电子天平;pH计;接种室 ——也叫无菌操作室 无菌操作室并非无菌，但应该保持清洁 ? 作用 供外植体的接种，培养物的转移和原生质体的游离培养操作之用。 ;无菌室;? 设计要求 墙壁光滑平整，地面平坦无缝，除出入口和通气口外，应当密闭，空气不能对流，或者空气经净化后进入室内。 无菌室旁边应设有缓冲间，缓冲间内应有紫外灯，随时可进行灭菌。; 无菌室内的日常灭菌：定期用甲醛和高锰酸钾混合后熏蒸，产生大量蒸汽，杀灭微生物。 使用前处理：用新洁尔灭（1：50）擦净，然后用紫外灯照射灭菌至少20分钟，操作前用70%酒精喷雾。;? 设 备;△ 超净工作台： 内设紫外灯、吹风装置、过滤装置等 每次实验前要用紫外灯灭菌20分钟以上，然后喷酒精灭菌，工作过程中注意一直开着吹风机，并且一定要关掉紫外灯，过滤网应经常清洗。;其它部件： △离心机：分离原生质体用； △点融合仪：细胞融合用。;3 培养室; 离体组织和试管苗生长发育的场所， 应为培养物创造适宜的温、光、气等条件。 ? 设计要求 培养室内要求内壁保温、光滑、室顶高2.6m左右，易于控制温、湿度，窗上要求装双层密封玻璃窗，室内有足够电源。 ;? 设 备;2、辅助实验室： ?细胞学实验室 ?摄影室及暗室 ?生化分析室;细胞学实验室;;理化分析试验室;细胞工程实验室基本设备配制小结;? 光温控制设备：时间程序控制器、空调及温度感应器。 ? 细胞培养设备：培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、摇床、生物反应器等。 ? 细胞学鉴定设备：光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜 ;基本操作技术;一、 洗涤技术;（一）器皿洗涤;? 常规洗涤;? 微生物大量污染的洗涤 △ 微生物污染器皿加压灭菌后再洗涤;（二）、试验材料的清洗 清洗目的：来自自然界的试验材料，包括来自土壤中的幼茎、磷茎，滋生着各种微生物，尤其是细菌的芽孢和真菌的孢子，一旦与培养基接触，就会很快的繁殖起来，造成培养基和培养材料的污染。 清洗方法：先用自来水冲洗5分钟，然后用中性洗涤剂清洗，注意勿损伤试验材料。再用自来水流水冲洗半小时，用于下一步的药剂灭菌。;二、灭菌、消毒技术; 高压高温处理（工具、器皿、培养基等） 物理或化学处理； 火烤后的物体； 健康的动植物不与内外部表面接触的组织 内部可能是无菌的（有时也有内生菌，但 不会影响培养，也不会污染） ;（二）灭菌、消毒技术作用和意义 植物组培中，凡用于培养和无菌操作的房间、器具、培养瓶、培养基，培养材料和操作者的衣物和手都应随时进行灭菌，以确保不受杂菌污染，否则，由于杂菌的生长繁殖速度一般都比培养的组织快得多，最终将把组织全部杀死，这些污染微生物还可能排泄对植物组织有毒的代谢废物，因此在培养容器内部保持一个完全无菌的环境是绝对必须的。;（三）灭菌、消毒种类;? 消毒、灭菌的对象： ★ 接种室 ★ 材料（外植体）： 完全杀死材料表面的微生物过程： 洗洁精→酒精→氯化汞等 ★器皿用具消毒（灭菌） ★ 培养基;（三）、培养基、器具的灭菌 用灭菌锅灭菌：一般121℃，灭菌20