全蛋白提取试剂盒.PDF

全蛋白提取试剂盒 50T WLA019a 100T WLA019b 仅用于科学研究,不能用于诊断 产品信息 产品名称 全蛋白提取试剂盒 产品概述 全蛋白提取试剂盒（Whole Cell Lysis Assay）可用于从哺乳动物组织和细胞中提取全蛋白，用 含有蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer匀浆裂解组织或细胞，提取过程简便高效。获得的 全蛋白可用于Western Blot、IP等后续研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究。 包装信息 WLA019a WLA019b 试剂名称 保存条件 (50T) (100T) Lysis Buffer 50ml 100ml -20℃ PMSF（100mM） 500μl 1ml -20℃ 保存条件 -20℃保存，本试剂盒自订购之日起一年内有效。 注意事项 1. 所有接触样品的用具及试剂均需预冷，整个过程须保持样品处于低温。 2. 提取蛋白后，如有必要，可透析除去表面活性剂。 3. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。 4. 实验过程中避免皮肤或粘膜与试剂接触。 操作流程 Ⅰ 细胞蛋白提取 1. 贴壁细胞：用预冷的1xPBS洗2-3次， 以洗去培养液。 2. 悬浮细胞：将细胞及培养液移至预冷的离心管中，离心10min（1000rpm）后，弃上清。 3. 将预冷的Lysis Buffer按每1ml加入10μl PMSF的比例混匀备用，Lysis Buffer加入量参考下表。 培养板规格 细胞数量 Lysis Buffer加入量 100mm（培养皿） 5x106个 600μl 35mm（6孔板） 1x106个 200μl（每孔） 4. 用细胞刮（沉淀振荡）充分破碎细胞，将其倒入离心管中超声；如果没有超声仪，冰上裂解 30min。 5. 12000rpm，4℃离心 , 10min，上清为全蛋白提取物，可进行蛋白定量。 6. 分装保存于-70℃，避免反复冻融。 Ⅱ 组织蛋白的提取 1. 取新鲜组织 , 用预冷的1xPBS洗2-3次。 2. 将组织剪成小块 , 放入预冷的研钵中 , 倒入液氮充分研碎。 3. 将预冷的Lysis Buffer按每1ml加入10μlPMSF的比例混匀备用。 4. 每100m