去甲基化作用对胃癌细胞生物学行为及xaf1基因表达的影响的论文.docVIP

　　去甲基化作用对胃癌细胞生物学行为及xaf1基因表达的影响的论文 【摘要】 目的：探讨去甲基化药物5脱氧杂氮胞苷(5azacdr)对体外培养的胃癌bgc823细胞增殖活性、细胞周期和凋亡以及对此细胞株xaf1基因表达的 影响 . 方法 ：用mtt法检测不同浓度5azacdr对细胞增殖活性的影响；pi染色和流式细胞仪检测不同浓度5azacdr处理72 h后细胞周期分布和细胞凋亡率；rtpcr法检测用药前后xaf1基因表达的变化. 结果：用1×103，5×103，10×103 nmol/l的5azacdr处理bgc823细胞6 d后，试验组细胞增殖抑制率较对照组明显升高（plt;0.05），并呈剂量依赖关系；流式细胞仪 分析 表明，各药物浓度处理72 h后凋亡率明显增加：试验组凋亡率分别为（4.53±0.21）%，（8.11±1.01）%和（11.56±0.86）%，与对照组(0.51±0.01)%相比较差异显著(plt;0.05). 在5azacdr处理前，未检测到bgc823细胞株xaf1 基因mrna表达，经过5azacdr处理后，xaf1 mrna重新表达. 结论：5azacdr可抑制bgc823细胞增殖；促进细胞凋亡；使xaf1基因甲基化状态得到逆转，而重新表达. 【关键词】 5氮2脱氧胞苷；xaf1基因；bgc823肿瘤细胞株；甲基化；细胞增殖；细胞凋亡 　　【abstract】 aim: to observe the effects of the demethylating agent, 5aza2′deoxyctidine (5azacdr), on the proliferation, cell cycle, apoptosis and xaf1 mrna expression of stomach cancer bgc823 cells. methods: the proliferation of bgc823 cells treated by different concentrations of 5azacdr tt assay. assessment of cell cycle and apoptosis ed by floetry (fcm); the change of xaf1 mrna expression iquantified by rtpcr before and after 5azacdr treatment. results: the groanner after exposure to 5azacdr at different concentrations (1×103, 5×103, 10×103 nmol/l) for different time. fcm analysis shoent (5×103, 10×103 nmol/l). conclusion: 5azacdr can inhibit the proliferation of bgc823 cells through blocking cell cycles and inducing cell apoptosis. it can also restore xaf1 gene transcription silenced by demethylation. 　　【keyethylation；proliferation；apoptosis 　　0 引言 　　凋亡抑制蛋白因子家族(iap)的成员在结构上具有1至3个高度保守的杆状病毒凋亡抑制因子重复序列(bir)结构域［1］，在肿瘤的增殖异常及对抗肿瘤药物耐受形成中发挥了重要作用. x染色体相关凋亡抑制蛋白(xiap)是iap中抑制caspase活性最强的成员. xiap相关因子1(xaf1)是一个新近发现可以拮抗xiap抗凋亡作用的蛋白，它可以逆转xiap对细胞的保护. xaf1在多种肿瘤细胞和组织中存在低表达或表达缺失，xaf1的基因沉默与其启动子高甲基化明显相关［2］. 我们采用5azacdr对胃癌细胞株进行处理, 检测xaf1基因表达，并分析肿瘤细胞生物学行为变化，以期进一步探讨胃癌的发生机制及 治疗 的新方法. 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 胃癌bgc823细胞株（兰州大学病理解剖学教研室）；rpmi1640培养液（美国gibco公司）；胎牛血清（兰州民海生物技术有限公司）；5azacdr（美国sigma公司）；配制5azacdr为1 mol/l的母液，-20℃保存，使用时用rpmi1640稀释为工作浓度. tap酶（上海生工生物工程技术有