去甲氯胺酮半抗原及其全抗原的合成与鉴定的论文.docVIP

　　去甲氯胺酮半抗原及其全抗原的合成与鉴定的论文 摘要】 在低温条件下，去甲氯胺酮与琥珀醛酸反应，合成了半抗原羧基-去甲氯胺酮，电喷雾质谱鉴定结果表明，目标半抗原合成成功；通过碳二亚胺法将半抗原与载体蛋白偶联制备人工抗原，红外光谱法鉴定结果表明，人工抗原合成成功，基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定表明去甲氯胺酮半抗原与牛血清白蛋白的偶联比为11∶1。经动物免疫，获得高效价特异性多克隆抗体，抗血清效价可达5.12×104。 【关键词】 去甲氯胺酮； 半抗原； 人工抗原； 合成； 鉴定 synthesis and identification of hapten and　plete antigen of norketa mineyａｎｇ ting-ｔing， zｈａｏ chun-ｃheng，sｈｅｎ ｘiao-ｐing，tａｎ ｂo-ｃhang，zｏｕ ｐan-ｋun，icrobiology research co.，ltd.， unicipal public security bureau，unicipal public security bureau，zhenjiang 212001)(jiangyin municipal public security bureau，jiangyin 214405)yancheng municipal public security bureau，yancheng 224001)　abstract under loperature conditions，the hapten carboxyl-norketamine ine and succinaldehyde acid.identification result using electrospray ionization mass shoed by infrared spectroscopy ide(edc) method.matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry(maldi-tof-ms) shomuning to rabbits. 　　keyine；hapten；artificial antigen；identification 　　1 引言 　　氯胺酮（ketamine，ket）是一种通过静脉给药的短效麻醉剂，其进入血循环后大部分进入脑组织，然后再分布于全身组织中，肝、肺和脂肪内的药物浓度也较高。.由于ket是毒品“k粉”的主要成分，近年来，其非法滥用现象严重。由于ket代谢的半衰期较短，摄入体内后，代谢生成去甲基氯胺酮(norketa mine，nket)、去氢去甲基氯胺酮(dehydronorketamine，dhnk)，因此在生物检材（如血液、尿液、毛发等）中代谢物的含量比较高[1,2]，作为检测指标，ket代谢物(主要是nket)的检测比ket的检测更加重要，而且对嫌疑人是否吸食ket的确认更加有效。目前，检测ket及其代谢物的分析方法主要有：气相色谱法（gc）、气-质联用法（gc-ms）、高效液相色谱法（hplc）、液-质联用法（lc-ms）、高效毛细管电泳法（hpce）酶联免疫吸附法（elisa）等[3~11]。由于常规仪器分析不适于批量样品的筛选检测，关于nket的免疫分析技术国内迄今尚未见相关报道。本文设计合成了nket的半抗原，并与牛血清白蛋白（bsa）和卵清蛋白（ova）偶联得到人工抗原，经免疫新西兰大白兔后，获得高效价的特异性多克隆抗体，为建立nket的免疫学检测方法提供了强有力的技术支持。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　spectronic 1.70紫外可见光分光光度计（意大利gbc公司）；nexus 670型傅立叶变换红外光谱仪（nicolet公司）；voyager de str基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（美国应用生物系统公司）； mk3酶标仪（雷勃公司）。去甲氯胺酮标准品（英国tocris公司）；牛血清白蛋白（bsa，sigma公司）、卵清蛋白（ova，sigma公司）；弗氏完全、不完全佐剂（北京生物制品研究所）；四甲基联苯胺（tmb）、羊抗兔igg（北京博奥森有限公司）；其他试剂均为分析纯。 　　2.2 实验方法 　　2.2.1 半抗原合成 取10 mg nket、3 mg氰基硼氢化钠（nabh3）或40 μl 15%琥珀醛酸溶液，分别加入6，1和1 ml混合溶剂(四氢呋喃-吡啶为5∶1， ｖ／ｖ）至完全溶解，于4 ℃冰箱放置备用；将琥珀醛酸溶液逐滴加入到nket溶液中，4 ℃下磁力搅拌，反应5 min；再逐滴加入nabh3溶液，将反应混合物在4 ℃下磁力搅拌2~3