实验14分子荧光分光光度法测定面粉中的核黄素.PDF

实验实验实验141414??????分子荧光分光光度法测定面粉中的核黄素分子荧光分光光度法测定面粉中的核黄素分子荧光分光光度法测定面粉中的核黄素 （维生素（维生素（维生素 B2B2B2））） 复旦化学系 教学实验中心 18:08:3418:08:3418:08:34 一、实验目的 二、方法原理 三、FL-4500荧光分光光度计 四、实验步骤 五、数据处理 六、思考题 18:08:3418:08:3418:08:34 一、实验目的 1. 掌握面粉样品的消化方法，了解溶液的pH值等对核黄素 荧光强度的影响。 2. 了解荧光分光光度计的主要结构及工作原理，掌握其正 确使用方法。 3. 掌握荧光分析法基本原理和实验方法。 18:08:3418:08:3418:08:34 二、方法原理 1. 荧光、荧光分子/荧光物质 2. 荧光分析法：特点 、???量方法 3. 荧光分光光度计：结构、原理、操作 4. 核黄素VB2：结构、性质、 面粉中提取方法 18:08:3418:08:3418:08:34 分子发光的基本原理分子发光的基本原理 ? 第一次记录荧光现象的是16世纪西班牙的内科医生和植物学家 N.Monardes ， 1575 年他提到在含有一种称为“ Lignum Nephriticum”的木头切片的水溶液中，呈现了极为可爱的天蓝 色。 ? 直到1852年，Stokes在考察奎宁和叶绿素的荧光时，用分光光 度计观察到其荧光的波长比入度计观察到其荧光的波长比入射光的波长稍微长些，才判断这射光的波长稍微长些，才判断这 种现象是这些物质在吸收光能种现象是这些物质在吸收光能后重新发射不同波长的光，而不后重新发射不同波长的光，而不 是由光的漫射作用所引起的，从而导入了荧光是光发射的概 念，他还由发荧光的矿石“萤石”推演而提出“荧光”这一术语。 ? 1867年，Goppelsroder进行了历史上首次的荧光分析工作， 应用铝—桑色素配合物的荧光进行铝的测定。 ? 19世纪以前，荧光的观察是靠肉眼进行的，直到1928年，才由 Jette和West提出了第一台荧光计。 18:08:3418:08:3418:08:34 分子发光的类型分子发光的类型 光致发光光致发光 化学发光化学发光//生物发光生物发光 按激发的模式分按激发的模式分 热致发光热致发光 类：类： 场致发光场致发光 摩擦发光摩擦发光 荧光荧光 瞬时荧光瞬时荧光 按分子激发态的类型分类：按分子激发态的类型分类： 迟滞荧光迟滞荧光 磷光磷光 按光子能量分类：按光子能量分类： 斯托克斯荧光斯托克斯荧光(Stokes)(Stokes)：： λλex λ 荧光荧光 λem 反斯托克斯荧光反斯托克斯荧光 (Antistokes)(Antistokes)：：λλex 18:08:3418:08:3418:08:34 λλem 共振荧光共振荧光(R(R ) ) λλ 荧光产生的机制荧光产生的机制——分子的活化与去活化过程 18:08:3418:08:3418:08:34 分子荧光分子荧光((磷光磷光))光谱光谱 1. 荧光(磷光)激发光谱与发射光谱 荧光(磷光)均为光致发光，在光辐射的作用下，荧光物质发射出不 同波长的荧光。 n n * * MX + ∑ hvi ? MX MX ? MX + ∑ hv j i=1