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 PAGE 10  PAGE 1 水溶性咔唑衍生物与DNA结合作用的研究 学生姓名：赵曼丽 指导老师：李俊芬 内容提要： 采用本实验室合成的咔唑衍生物，通过荧光和紫外–可见光谱法并结合I–效应、离子强度的影响、DNA变性等实验手段，研究了水溶性咔唑衍生物与小牛胸腺DNA的相互作用。结果表明，DNA对咔唑衍生物的荧光有明显的猝灭作用，猝灭过程为动态猝灭。由荧光猝灭实验数据，计算出咔唑衍生物与DNA之间作用的结合常数和热力学参数，推测两者结合的主要驱动力是熵驱动过程。KI猝灭实验发现，DNA对咔唑衍生物有明显的保护作用。NaCl浓度的增加，DNA–咔唑衍生物体系荧光强度无明显变化；DNA变性实验发现，dsDNA与咔唑衍生物结合能力大于ssDNA；推测咔唑衍生物可能以嵌插方式和沟漕作用相结合的混合模式和DNA作用。 关键词: 咔唑衍生物；小牛胸腺DNA ；荧光光谱；紫外光谱；结合模式. 前言： DNA分子基本单位是脱氧核糖核苷酸，DNA是基因表达的物质基础，更是许多药物的靶分子，研究药物小分子与DNA的相互作用，有助于认识药物与DNA的结合机理，同时也为以DNA为靶标的药物分子设计提供有价值的信息并阐述一些抗肿瘤、抗病毒药物及致癌物的作用机理, 帮助人们了解某些疾病的发病机理, 这对于寻找副作用小、疗效好的抗癌药物母体和进行体外筛选抗癌药物, 以及研究抗癌药物在生物体内治疗疾病的本质具有重要意义。DNA与许多化合物相互作用主要包括三种方式：静电作用、沟槽键合和嵌插作用，其中嵌插作用是结合最为紧密和最为有效的一种作用方式。咔唑衍生物具有生物活性和强的荧光发射。本文采用荧光和紫外-可见光谱法，研究了DNA和咔唑衍生物的相互作用，运用I–离子猝灭效应、DNA热变性和离子强度影响等实验手段，考察了咔唑衍生物与DNA之间的作用模式，该研究为了解咔唑衍生物与DNA的作用机理提供一定的理论基础。 1 实验部分 1.1 主要仪器和试剂 Cary Eclipse型荧光分光光度计（美国WARIAN公司）；TU-1901型双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。 咔唑衍生物（本实验室合成,为紫色针状的晶体，??构如图1所示），分子式为C12H52N4Na2012（M=1090），用二次水配置成1×10-3mol/L储备溶液；ctDNA(Sigma公司），贮备溶液用0.1mol/L的NaCL溶液配制，于0-40C保存，经UV光谱检验测定A260/A2801.8，表明基本上不含蛋白质，纯度符合要求。DNA的准确浓度以核酸的摩尔磷吸收系数（P)表示，测量DNA在260nm处的吸收光度，然后根据εDNA=6600M-1cm-1来确定，经确定DNA浓度为5.2×10-3mol/L；0.1mol/L–1 的KI溶液；0.1 mol/L–1 的NaCl溶液；0.05 mol·L–1的Tris–HCl(pH 7.4)缓冲溶液；试剂均为分析纯，实验用水为石英亚沸高纯水蒸馏器（江苏勤华玻璃仪器厂）二次蒸馏水。 图1 咔唑衍生物的结构式 1.2 实验方法 1.2.1 邻甲酚酞络合剂和咔唑衍生物的荧光光谱测定 配相同浓度1×10-3mol/L的邻甲酚酞络合剂和咔唑衍生物溶液，分别准确量取3mL于1cm石英杯中，扫描其荧光光谱，荧光激发狭缝设为5nm，发射狭缝设为10nm. 1.2.2 吸收光谱滴定 在1cm比色皿中加入2.0mlPH7.4的Tris–HCl缓冲溶液，分别测定咔唑衍生物为1×10-5mol/L、1×10-4mol/L、5×10-4mol/L、1×10-3mol/L的紫外可见吸收光谱，并以Tris–HCl作为空白校正。确定1×10-3mol/L的咔唑衍生物溶液为与ctDNA作用的浓度。准确加入3mL的1×10-3mol/L的咔唑衍生物溶液，然后用微量进样器依次加入10μL/次的ctDNA储备溶液，考察吸收光谱的变化。另以相应浓度的DNA溶液作为参比。 1.2.3 荧光光谱滴定 准确量取3mL浓度为5×10-3mol/L的咔唑衍生物于1cm石英杯中，扫描其荧光光谱，其荧光激发狭缝设为5nm，发射狭缝设为10nm，然后用微量进样器依次加入5μL/次的ctDNA储备溶液，在荧光分光光度计中扫描荧光光谱，直至饱和。 1.2.4 KI猝灭效应 准确量取3mL浓度为5×10-3mol/L的咔唑衍生物于1cm石英杯中，扫描其荧光光谱，其荧光激发狭缝设为10nm，发射狭缝设为10nm.然后用微量进样器依次加入5μL/次的阴离子猝灭剂KI储备溶液，在荧光分光光度计中扫描荧光光谱。在