桔皮素对人肝癌细胞株SMMC7721抑制作用的初步研究的论文.docVIP

　　桔皮素对人肝癌细胞株SMMC7721抑制作用的初步研究的论文 【摘要】 目的：探讨桔皮素对人肝癌细胞株smmc7721的抑制作用。方法：采用四唑盐（mtt）比色法观察不同浓度桔皮素对人肝癌细胞株smmc7721细胞增殖的影响，计算半数抑制浓度ic50；绘制细胞株smmc7721的生长曲线观察桔皮素对其增殖的影响。结果：mtt结果显示不同浓度的桔皮素对smmc7721的生长均有一定的抑制作用，同一时间，各浓度组与对照组相比均有统计学差异（plt;0.05）；桔皮素浓度为0.24-30μg·ml-1时，对smmc7721细胞在药物处理72小时后抑制率为3.85%～93.59%，且72小时的ic50为14.6921.11μg·ml-1。生长曲线结果提示，桔皮素对smmc7721细胞的抑制作用呈明显时效和量效关系。结论：桔皮素能抑制人肝癌细胞株smmc7721的增殖。 【关键词】 桔皮素；smmc7721；抑制增殖 芸香科植物橘是我国的一种传统中药材,其成熟果皮称陈皮、种子称橘核、幼果或幼果皮称青皮,中、内果皮间的维管束群称橘络,均以理气和胃、化痰降逆入方剂;橘的幼果称枳实,不成熟的青果横切两半称枳壳,具有破气消积、化痰消痞之功效。[1]。随着柑橘综合利用的深入开展和新技术的应用,柑橘果实中具有抗现代疾病,尤其是抗肿瘤的功效成分逐步被提取和分离出来，在用柑橘类果实的提取成分对不同疾病作用的研究中,经统计发现,柑橘果实提取的混合物中,黄酮类化合物(flavonoids)、类胡萝卜素(carotenoid)和柠檬苦素类(limonoids)具有抗癌活性功效[2]，主要抗肿瘤有效成分分为柠檬苦素类似物，多甲氧基黄酮。. 柠檬苦素类似物是一种三萜烯类化合物，主要包括三种物质即柠檬苦素（linmonoid）,诺米林（nomilin）和黄柏酮(obacunone)，证实具有较强抗口腔癌，喉癌，肺癌，胃癌，皮肤癌肝癌，乳腺癌的作用，还能抑制结肠癌，白血病等。 体外实验证明柑橘黄酮类化合物对人非小细胞肺癌a549[3]，产黑色素的鼠黑色素细胞瘤b16，黑色素瘤4a5，人类t细胞淋巴瘤ccfhsb2，人胃癌淋巴结转移细胞tgbciitkb有很强的增殖抑制作用，而对正常人类细胞系仅有较弱的抗增殖活性[4]。多甲氧基黄酮主要包括川陈皮素和桔皮素两种。已经证实桔皮素在体外对人乳腺癌，结肠癌，肺癌细胞等有较强的抑制增殖作用[5,6,7]。本研究的目的在于在细胞水平观察并证实桔皮素对人肝癌smmc7721细胞的抑制作用。 1 材料与方法 1.1 材料 细胞株：选用人肝癌smmc7721细胞由本实验室冻存；药物：桔皮素:由四川大学药理教研室提供，以二甲基亚砜（dmso，国产分析纯）配制成30mg·ml-1的原药储存液，-20℃保存，临用时以rpmi1640完全培养基稀释；试剂：rpmi1640培养基（美国gibco公司）；青霉素，链霉素(华北制药有限公司)；优级新生牛血清(兰州中美合资民海生物公司，生产批；四甲基偶氮唑盐（mtt）（sigma公司）；胰蛋白酶(美国gibco公司)；台盼蓝（美国sigma公司）；dmso（国产分析纯，成都科龙化工试剂厂）；仪器：超净工作台(苏州安泰空气技术有限公司),二氧化碳培养箱(日本san yo公司),倒置相差显微镜(德国olympus公司),全自动酶标仪(德国bio2 rad,model 1550),细胞培养板及血球计数板。 1.2实验方法 1.2.1 mtt测定取对数生长期细胞，rpmi1640培养液悬浮并调整浓度为3×104个/ml,每孔100μl,即每孔3×103个细胞接种在96孔板中，5%co2，饱和湿度37℃培养。待24小时后细胞完全贴壁，实验组加入rpmi1640完全培养基稀释的桔皮素至终浓度分别为0.24，0.47,0.94,1.88,3.75,7.50,15.00,30.00μg·ml-1,阴性对照组再加入完全培养基，溶剂对照组加入与各剂量组相对应dmso浓度的完全培养基，最高dmso浓度为0.1%（一般认为dmso≤0.1%时不引起细胞的生物学性状的改变），每孔终体积为200μl。培养72小时后，每孔再加入5mg·ml-1的mtt储存液20μl/孔，继续于5%co2，饱和湿度37℃孵箱中孵育4小时后终止实验。小心吸弃每孔上清液，并加入二甲基亚砜（dmso）100μl/孔。于10分钟内振荡混匀在酶标仪上室温于490nm波长处测定各孔的od值，重复实验3次，按公式：gi（生长抑制率）=1（药物组od值/对照组od值）×100%计算各组的生长抑制率。用ndst软件bliss法计算ic50值。 1.2.2生长曲线的测定取对数生长期细胞，0