温度和pH的交互作用对黄绿青霉菌产毒影响的论文.docVIP

　　温度和pH的交互作用对黄绿青霉菌产毒影响的论文 【关键词】黄绿青霉菌；黄绿青霉素：产毒；交互作用 　　摘要：目的在实验室条件下观察温度、ph对黄绿青霉菌（pcv）产毒的影响及其交互作用。方法采用析因实验设计，用察氏培养基培养黄绿青霉菌，二氯甲烷提取黄绿青霉素(cit)，高效液相色谱法检测cit毒素含量。结果黄绿青霉菌在高温、低温、酸性及碱性条件下均可产毒，产毒量6030～33610μg／g培养基；高温、碱性条件下产毒量较高，是低温条件的2倍以上。结论温度和ph对黄绿青霉菌产毒量有较大影响，且有交互作用。 　　关键词：黄绿青霉菌；黄绿青霉素：产毒；交互作用 　　interactionoftemperatureandphontoxinproductionofpenicilliumcitreoviridin 　　houhaifeng,qiyongxiu,liquniology,taishanmedicalcollege(taian271000,china) 　　abstract：objectiveobservetheeffectoftemperature,phandtheirinteractiononpenicilliumcitreoviridin#39;s(p.c.v.)toxinproductioninlaboratory.methodsp.c.v.ediumindifferentconditionsaccordingtothefactorialexperimentfortethaneandquantitatedbyhplcmethod.resultsp.c.v.producedcitinallcharlesculturemedium.quantitiesofcitproducedbyp.c.v.edium.p.c.v.producedmorecitinconditioninacidcharlesculturemedium.conclusionquantitiesofcitproducedbyp.c.v.perature,phandtheirinteraction. 　　keycitreoviridin(pcv)；citreoviridin(cit)；productionoftoxin;interaction 　　黄绿青霉菌(penicilliumcitreoviridin，pcv)属单轮青霉群，是污染粮食常见的真菌之一，尤其是在大米、小米霉变过程中经常可检出黄绿青霉菌，该菌污染的粮食外观呈黄绿色。.黄绿青霉菌产生的黄绿青霉素(citreoviridin，cit)是一种具有心脏血管毒性、神经毒性、遗传毒性的真菌毒素〔1〕。相关研究表明，cit是导致克山病的可疑病因〔2〕，并且温度、培养时间、酸碱度等黄绿青霉菌产毒条件与克山病病区环境条件十分类似〔3〕。为进一步探讨黄绿青霉菌产毒特征，本文对温度、ph对该菌产毒的交互作用进行观察。现将结果报告如下。 　　1材料与方法 　　11材料(1)菌株：黄绿青霉菌菌株(中科院微生物研究所)，菌株号为34033。(2)培养基：黄绿青霉菌培养采用察氏培养基，120℃高压灭菌20min。待温度降至60℃左右时，加入青霉素100u／ml，混匀。无菌条件下分装入培养皿，制成平板待用〔4〕。(3)标准溶液：cit标准品(美国sigma公司)分别用流动相配成1，2，5，10，40和100mg／l的标准溶液，冷藏待检。(4)仪器与试剂：m×150mm,5μmhypersil硅胶色谱柱(大连依利特公司)。 　　12方法 　　121培养条件控制菌株培养在本所生物培养室进行，温度分别控制在30和8℃；通过高压灭菌前添加naoh和hcl溶液，分别配制成ph50和90的培养基。采用2×2析因设计方法观察温度、ph对产毒的独立作用及交互作用；每种条件下培养5份，培养时间2周。 　　122样品提取〔5，6〕将培养物搅碎，移入具塞三角烧瓶，加入50ml二氯甲烷，塞紧磨沙塞，振荡10min，避光静置30min。过滤，取滤液2ml，在避光、通风条件下挥干，得到粗毒素，定容后上机检测。 　　123分析条件〔5，6〕采用高效液相色谱法检测标准溶液及样品中的cit含量，流动相为乙酸乙酯：正己烷(7∶3，v／v)；流速为1ml／min；检测波长为383nm；分析时间10min。 　　13统计分析采用pog／l)为自变量，色谱图峰面积(mv×s)为应变量，建立标准曲线方程：y=24400x+3020，相关系数(r)为099994，线性关系较好。 　　22不同温度及ph条件下黄绿青霉菌产毒量在高温、低温、酸性及碱性环境条件下黄绿青霉菌均可产生cit毒素，产毒量分别为：高温酸性条件下（9214±1600)μg／g；高温