RNA聚合酶识别序列.ppt

第十四章 核酸的生物合成;二、思考题;2、简述Meselson－Stahl的实验，并解释其如何证明了DNA是半保留复制的3、有哪些因素可以导致DNA的损伤，机体通过什么机制对其进行修复？4、简述真核生物进行不连续DNA复制时，在复制叉处发生的一系列步骤。5、在E.coli中进行DNA复制至少需要哪些蛋白？每个蛋白的功能是什么？;本章主要内容;第一节 DNA的生物合成(复制) ;反中心法则;一、复制（replication）;（一）半保留复制;按半保留复制方式，子代DNA与亲代DNA的碱基序列一致，即子代保留了亲代的全部遗传信息，体现了遗传的保守性。;1. 起始点 是含有100-200个碱基的一段DNA。 复制叉 DNA的两条链在起始点分开形成叉子样 的“复制叉” （replication fork），也叫 “生长点” （growing point）, 随着复制叉的移动完成DNA的复制过程。 细胞内存在能识别起始点的特种蛋白质。;2. 方向 DNA复制朝一个方向（单向复制，unidirectional）， 两个相反方向进行（双向复制，bidirectional，主要）;全保留与全新复制;真核生物染色体: 是多复制子的复制。 复制子是能够独立完成复制的功能单位。 复制子(replicon)两个相邻复制原点间的距离。 ;半不连续复制;RNA引物的大小:; 在原核生物: 50～100个核苷酸， 而在真核生物: 10个核苷酸。 RNA引物的碱基顺序，与模板DNA的碱基顺序相配对;（三）、参与DNA复制的主要酶类;1解链酶（解螺旋酶） (helicase);1）解链酶（解螺旋酶）示意图;2） DNA拓扑异构酶(DNA topoisomerase);3）单链DNA结合蛋白 (single-stranded DNA-binding protein SSB）;2、引物酶(primase)本质上是一种依赖DNA的RNA聚合酶(DDRP）;原核DNA聚合酶;;DNA聚合酶： 链延长（聚合）反应;亲链DNA;DNA-pol ?;DNA连接酶; 在复制中起最后接合缺口的作用。 在DNA修复、重组及剪接中也起缝合缺口作用。 也是基因工程的重要工具酶之一。;复制的准确性不高：会改变生物的遗传性能， 易引起突变或致死。 若转录和翻译的失误：一般只涉及细胞中某种RNA或蛋白质的产生，不会改变生物的遗传性能 因此，DNA聚合酶的校正作用是保证复制准确性的数种途径之一。;1、碱基的配对规律：模板链与新生链之间的碱基 配对保证碱基配错几率约为1/104～1/105。 2、DNA聚合酶的3’→5’外切酶活性的校对功能，使碱基的错配几率又降低100～1000倍。 3、DNA的损伤修复系统。;（四）、DNA的复制过程;(1)复制的起始;前导链的合成过程;;DNA聚合酶Ⅲ催化前导链和后随链同时合成;前导;(2)、复制的终止 ; 两条子链分别与两条亲链重新形成双螺旋结构， 生成两个与亲代DNA完全相同的子代DNA。;真核生物的DNA复制（ DNA指导下的DNA合成） ;1970年Temin和Baltimore同时从肉瘤病毒中发现发现“反转录酶”,此酶催化RNA合成DNA，合成方向5?3’， 即RNA指导下的DNA聚合酶; 此酶催化遗传信息从RNA流向DNA,与转录作用正好相反; 此酶以dCTP、dGTP、dATP、dTTP为底物,催化生成与病毒RNA（模板）碱基序列互补的DNA。; 作用：1、 RNA指导的DNA合成。 2、 RNA水解反应。 3、 DNA指导的DNA合成。 特点：无外切酶活性，转录错误率高2X104。 [反转录酶病毒（retrovirus）] 性质：一类RNA病毒，含反转录酶，因致癌又称RNA肿瘤病毒。如HIV-人类免疫缺陷病毒，可引起AIDS。 1、组成：核心RNA，蛋白外壳。; 1、病毒RNA与cDNA形成杂交体： 病毒 进入宿主细胞后脱去外壳， 以病毒RNA为模板，胞内dDNT为底物， 由反转录酶催化合成cDNA ——cDNA 一条与病毒RNA链互补的DNA链。 2、反转录酶催化释放出cDNA ， 再以cDNA为模板合成一条互补DNA链， ——形成双股cDNA