脐血CD34+造血干-祖细胞基因表达图谱的研究的论文.docVIP

　　脐血CD34+造血干/祖细胞基因表达图谱的研究的论文 【摘要】 目的：通过脐血cd34+造血干/祖细胞的基因表达分析，理解造血干/祖细胞生物学特性。方法：利用minimacs免疫磁珠法从脐血细胞中分离cd34+造血干/祖细胞，提取总rna，用smartpcr技术从微量rna中扩增产生足够量的cdna用于高密度点阵膜分析检测cd34+造血干/祖细胞表达的基因。结果：在所检测的588个基因中，发现63个基因具有显著的表达水平，其中18个基因强表达。这些基因主要涉及造血干细胞增殖、分化、应激响应、凋亡、转录调节以及细胞周期等。结论：对理解脐血干/祖细胞生物学性质以及指导造血干细胞体外培养提供了分子生物学基础。 【关键词】 脐血 cd34+造血干/祖细胞 smartpcr 高密度点阵膜 　　gene expression analysis of primary human cd34+ hematopoietic stem and progenitor cells from umbilical cord blood 　　li qunliang, cai haibo, liu qiatopoietic stem and progenitor cells(hspcs) derived from umbilical cord blood(ucb).methods:cd34+ hspcs fresh ucb by minimacs seperation. smartpcr technology ployed to amplify cdna from isolated rna. hybridization experiments ed to determine gene expression pattern of cd34+ hspcs using atlas cdna expression array covering 588 genes.results:the data from gene expression analysis revealed that 63 genes ainly in proliferation, differentiation, stress responses, apoptosis, transcription regulation, and cell cycle.conclusion:this study gives some ne of hspcs, and it may be helpful to understand biological properties and improve manipulation of hematopoietic cells. 　　［key bilical cord blood；cd34+ hematopoietic stem and progenitor cells；smartpcr；cdna array 　　造血干细胞具有自我更新和分化成所有血细胞的潜能，对维持造血功能的动态平衡起着至关重要的作用。.鉴定造血干/祖细胞的基因表达图谱对认识造血发育和调控具有重要的意义，为改善其临床应用以及指导体外培养提供理论基础。因此研究cd34+造血干/祖细胞的基因表达图谱成了人们探索的热点。可能是由于脐血干细胞数量少的缘故，致使目前只有极少的相关报道。mao等［1］通过大量收集脐血和pcr方法将cd34+造血干/祖细胞表达的基因反转录成cdna克隆到λzapⅱ载体中进行测序，所得到的ests(expressed sequence tags)与公共基因库对比分析，发现855个已知基因表达。这些基因主要涉及造血、细胞分裂、细胞信号、细胞结构、细胞防御反应、基因表达以及代谢等，为造血干细胞或其他干细胞系统的基因表达分析提供了借鉴作用。在此，本实验采用smartpcr技术结合高密度点阵膜分析策略对脐血cd34+造血干/祖细胞的基因表达进行了研究，所得结果对造血干细胞生物学特性的理解具有启示作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 cd34+造血干/祖细胞的分离纯化 采用minimacs免疫磁性吸附柱分离装置和cd34+造血干/祖细胞富集试剂盒（milienyi biotech公司），按说明进行cd34+造血干/祖细胞的分离纯化。为了提高cd34+造血干/祖细胞的纯度，将第一遍收获的cd34+造血干/祖细胞再用一根新的minimacs吸附柱进行第二轮分离纯化，经过两轮分离富集得到的cd34+造血干/祖细胞纯度高达95%以上。 　　1.2 总rna提取 用trizol（invitrogen）试剂提取从少量cd34+造血干/祖细胞中提取总rna，采用rq1 rnase