脂多糖对罗氏沼虾血细胞存活.doc

流式细胞术检测脂多糖对罗氏沼虾血细胞 活性和免疫功能的影响?基金项目: 国家自然科学基金资助项目; 广东省教育部产学研结合资助项目（2006; 国家科技支撑计划项目(2007BAD29B06); 广东省科技计划项目(2007B020708013); 广东省重点科技项目(2009A020101006); 广州市科技支撑计划项目（2009Z1-E681） 第一作者: 冼健安(1983-), 男, 博士研究生, 研究方向: 水生动物营养免疫学; E-mail: xian-ja@163.com. 通讯作者: 王安利(1957-), 男, 教授, 博士生导师, 研究方向: 水生动物营养免疫学和健康养殖生态学研究; E-mail:  HYPERLINK mailto:wanganl@ wanganl@; 联系电话: 020 冼健安，王安利*，苗玉涛，伍娟 （华南师范大学生命科学学院，广东省水产健康安全养殖重点实验室，广东省高等学校生态与环境科学重点实验室，广州 510631） 摘 要：以脂多糖(LPS)刺激罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)离体血细胞，应用流式细胞术检测血细胞大小、活性、吞噬功能和呼吸爆发的变化，并检测细胞培养液中的酚氧化酶活力。根据前向角散射光(FSC)和侧向角散射光(SSC)特征的不同，可把罗氏沼虾的血细胞分为三个亚群：透明细胞、小颗粒细胞和大颗粒细胞。血细胞经LPS 刺激20-40min后，大型血细胞(小颗粒细胞和大颗粒细胞)的比例开始迅速下降，而细胞的大量死亡从40-60min开始。添加胰蛋白酶抑制剂(TI)能显著减缓LPS导致的细胞变小和死亡。3和5μg/ml LPS能显著提高血细胞的吞噬活力、呼吸爆发水平和培养液中的酚氧化酶活力。结果表明，LPS是罗氏沼虾血细胞的强免疫刺激物和毒物，它刺激血细胞脱颗粒释放酚氧化酶，提高了血细胞的吞噬能力，促进了大量活性氧的产生；其毒性致血细胞死亡可能是血细胞被诱导产生的过量活性氧带来的氧化伤害所造成的。 关键词：脂多糖；罗氏沼虾；血细胞；免疫反应；流式细胞术 中图分类号：Q952.5 文献标识码: A Flow cytometric analysis of viability and immune response of Macrobrachium rosenbergii haemocytes activated by lipopolysaccharide XIAN Jian-an, WANG An-li *, MIAO Yu-tao, WU juan (Key Laboratory of Ecology and Environment Science in Guangdong Higher Education, Guangdong Provincial Key Laboratory for Healthy and Safe Aquaculture, College of Life Science, South China Normal University, Guangzhou 510631) Abstract: Cell size, viability, phagocytosis activity and respiratory burst (RB) phenoloxidase (PO) activity of lipopolysaccharide (LPS) stimulated haemocytes from Macrobrachium rosenbergii were measured by flow cytometry. Phenoloxidase (PO) activity of the cell supernatant were was also determined. According to the forward light scatter (FSC) and the side light scatter (SSC) signals from of each individual, haemocytes were could be divided into three subpopulations: hyaline cells, semigranular cells and granular cells. After 20-40 min of incubation with LPS, the percentage of large cells (semigranular and granular cells) decreased sharply, whi