血清清蛋白_γ-球蛋白的分离纯化与定量----薛彪。。。裴婕教程.doc

 PAGE \* MERGEFORMAT 15 血清清蛋白、γ-球蛋白的分离与纯化与定量 实验设计 南方医科大学 公共卫生与热带医学学院学院 10级预防医学（食品安全） 学号：3100091046姓名：薛彪 学号：3100091047姓名：裴婕 日期：2011年10月19日 摘 要 健康人或动物血清中含有丰富的血清清蛋白，α1-球蛋白，α2-球蛋白，β-球蛋白，γ-球蛋白等。血清白蛋白是血清中含量最丰富的蛋白质，占血清总蛋白量的50%以上，是维持血液渗透压的重要物质。血清清蛋白还是血液中脂肪酸的携带者。当身体需要能量或者需要建造材料时，脂肪细胞就把脂肪酸释放到血液中 ，脂肪酸被血清蛋白获取，并被运送到需要的部位。γ-球蛋白又称免疫球蛋白，在血清蛋白质中数量居第三，具有重要的一用价值。各种血清蛋白的功能，性质，结构有所不同。因此不同蛋白质的分子量、溶解度、在一定的带电情况等都有所不同，本试验就是利用各种蛋白质的差别 ，实现蛋白质的分离、纯化与定量。 关键词：血清清蛋白 γ-球蛋白 蛋白质的差别 分离与纯化 目 录 前言………………………………………………………………………………2 实验目的…………………………………………………………………………3 实验原理…………………………………………………………………………4 实验器材与试剂…………………………………………………………………5 实验步骤…………………………………………………………………………6 结果及计算………………………………………………………………………13 实验预期及可行性评估…………………………………………………………14 注意事项…………………………………………………………………………15 参考文献………………………………………………………………………… 1. 前言 血清蛋白是血浆里最丰富的蛋白质。每一个蛋白分子能携带七个脂肪酸分子。这  HYPERLINK /albums/1367873/1367873.html \l 0$f6428f8f44f23ec1513d92ff \o 查看图片 \t _blank ?? 血清蛋白模型 些脂肪酸分子结合在蛋白的缝隙中，它们富含碳的尾部埋藏在里面安全地避开周围的水分子。血清蛋白同样能够携带许多其它的不溶于水的分子。尤其是血清蛋白，能够携带着许多药物分子，比如布洛芬。 正因为血清蛋白是如此普遍地存在于血液中并且如此容易地被提纯，所以它成为科学家最早研究的蛋白质之一。今天，当需要一种蛋白质时，一种来源于牛体内的类似的蛋白在研究中被广泛地使用，这种蛋白叫做牛族血清蛋白或者称作BSA。许多酶在稀溶液中不稳定，解决的办法是加入一些牛族血清蛋白。在试验中它能使酶稳定，且相对地中性,不会影响酶的性质。而γ-球蛋白在血清蛋白质中的总含量也达到了第三位，在医学和临床上有着重要的意义。 2. 实验目的： 2.1 从血清中分离并纯化血清清蛋白和γ-球蛋白。 2.2 进行血清清蛋白和γ-球蛋白的纯度鉴定。 2.3 进行血清清蛋白和γ-球蛋白的定量测定。 3．实验原理： 3.1 粗提取（盐析法） 在蛋白质溶液中加入大量中性盐，以破坏蛋白质的胶体性，而使蛋白质从水溶液中沉淀出成为盐析。 蛋白质表面的电荷和水化膜是维持蛋白质亲水胶体特性的两个重要因素，当其中一个受到破坏，都会降低胶体的稳定性，使蛋白质分子凝聚而发生沉淀，从而达到盐析的目的。而各种蛋白质的颗粒大小所带电荷、亲水性都不同，盐析所需的最低盐浓度也各不相同，因此可以利用不同浓度的盐溶液分别析出各种蛋白质，从而达到蛋白质初步的分离。 3. 2脱盐 用盐析法分离的得蛋白质中含有大量的中性盐，会妨碍蛋白质进一步纯化，因此必须首先去除。常用的方法有透析法、凝胶层析法等，本试验采用的是凝胶层析法，利用得失蛋白质与无机盐之间分子量的差异，当溶液通过SephadeG-25凝胶柱时，溶液中分子直径达的蛋白质不能进入凝胶颗粒的网孔而析出，小分子的则滞留在凝胶颗粒中而后洗脱出来。 3.3 纯化 离子交换是溶液中的离子和交换剂上的离子进行可逆的的交换过程。带正电荷的交换剂称为阴离子交换剂；带负电荷的交换剂称为阳离子交换剂。 本实验采用的DEAE纤维素是一种阴离子交换剂，溶液中带负电荷的离子可与其进行交换结合，带正电荷的点正电荷的离子则不能，这样便可达到分离纯化的目的。 脱盐后的蛋白质溶液尚含有各种球蛋白，利用它们的等电点的不同可进行分离。血清中各种蛋白质的pI各不相同，因此，在同一醋酸铵缓冲液中，各蛋白质所带的电荷不同