高效液相色谱法测定龙胆花中4种活性成分的含量的论文.docVIP

　　高效液相色谱法测定龙胆花中4种活性成分的含量的论文 【摘要】 　　目的建立反相高效液相色谱法同时测定龙胆花中落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的含量。方法采用zorbax sb－cm18（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱；流动相甲醇和水（含0.04%磷酸）为15∶85的比例洗脱；检测波长为238 nm；流速1 ml·min-1；柱温30℃。结果4种成分均达到基线分离，落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的线性范围分别为0.10～6.25 μg (r =0.999 9)，0.076～3.5 μg (r =0.999 8)，0.04～5.65 μg(r = 0.999 9)和1.27～7.62 μg (r =0.999 8)；平均回收率分别为99.2％(rsd=2.6％,n=5)，103.0％(rsd=1.5％,n=5)，101.0％(rsd=1.1％,n=5)，99.7％ (rsd=3.6％,n=5)。结论该方法测定快速，结果准确、可靠。 【关键词】 反相高效液相色谱 落干酸 獐牙菜苦苷 龙胆苦苷 獐牙菜苷 龙胆花 　　abstract：objectiveto establish a quantitative method of simultaneous determination of loganic acid,sarin ,gentiopicroside and s hemsl by rp-hplc.methodsthe sample n of zorbax s-c18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) and eluted ethanol and , the flol·min-1，and the column temperature arin，gentiopicroside and sethod is rapid and precise . 　　key arin; gentiopicroside; s hemsl 藏药龙胆花为龙胆科植物蓝玉簪龙胆gentiana veitchiorum hemsl的花，藏名“榜间”，具有清湿热、泻肝胆实火、镇咳、利喉、健胃功能,主治感冒发烧、目赤咽痛、肺热咳嗽、胃炎、脑膜炎、尿道炎、气管炎、阴痒及阴囊湿疹、天花等［1］。. 龙胆花主要含有裂环环烯醚萜苷类活性成分，如落干酸（loganic acid）、獐牙菜苦苷(sarin)、龙胆苦苷(gentiopicroside)和獐牙菜苷(sm×4.6 mm,5 μm）色谱柱；kq3200超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。 獐牙菜苦苷、龙胆苦苷对照品购自 中国 药品生物制品检定所；落干酸、獐牙菜苷对照品由本实验室自行分离得到，经归一化法测定，纯度大于98％；甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为自制三重蒸馏水。 龙胆花2007-08采于青海省果洛州玛沁县，由青海普兰特藏药研究所孙洪发研究员鉴定，阴干后粉碎过80目筛，冷藏保存。 　 　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱为zorbax sb－c18（250 mm×4.6 mm,5 μm）；流动相为甲醇∶水（含0.04%磷酸）为15∶85；流速1 ml·min-1；检测波长238 nm；柱温30℃。该色谱条件下落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷4种成分均被洗脱且达到基线分离。色谱图见图1。 　 　　2.2 对照品溶液的制备 　　分别精密称取适量的落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷对照品，用甲醇溶解，置10 ml的容量瓶中定容，摇匀作对照品溶液备用。使用时稀释为所需浓度。 　　2.3 供试品溶液的制备精密称取粉碎至80目的样品0.5 g，加入甲醇15 ml，超声提取40 min，抽滤，以甲醇洗涤滤渣两次，1 ml/次。重复上述操作，所得滤液与前一次滤液合并，浓缩后，用甲醇定容于50 ml容量瓶中。过0.45 μm滤膜，在选定色谱条件下测定有效成分的含量。 　　2.4 线性关系考察 　　分别精密量取适量4种对照品储备液，置2 ml容量瓶中，用甲醇定容于刻度，得混合对照品标液系列溶液。取混合对照品标液系列溶液分别进样10 μl，按“2.1”项下的色谱条件进行测定，各组分进样量(μg)与峰面积a的线性方程及相关系数见表1。表1 4种活性成分的线性方程及线性范围（略） 　　2.5 检测限 　　在选定的色谱条件下，当信噪比s/n＝3时，对各组分最低检测限进行测定，结果表明，落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷的最低检测限分别为0.56，0.25，0.45，0.84 ng。 　　2.6 精密度实验按“2.1”项下的色谱条件，取10 μl混合对照品溶液进样，测定色谱峰的峰面积， 计算