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了解和学习油菜花药培
了解和学习油菜花药培养技术。; 油菜花药培养是获得单倍体的重要途径。如果利用杂种一代的花药培养,可将杂种一代的异质配子培育成单倍体小植株,经染色体加倍形成双单倍体纯合个体,经选择可以获得优异的材料,从而可缩短育种周期,提高育种效果。此外,花药培养可克服远缘杂种的不育性,可以在细胞水平或单倍体水平上作诱变处理,也能提高育种效果。; 油菜花药培养有以下步骤:
(1)花粉发育时期的选择,
(2)诱导花药产生愈伤组织,
(3)诱导愈伤组织进行器官分化,
(4)小植株的移栽,形成花粉植株。;1、用品:显微镜,培养皿,镊子,记载表。 ;操作台;2、主要作法:
在始花期选择油菜品种(或杂种)生长健壮的植株,取其主茎顶端蕾盘(即主花序,因花序未伸长而称蕾盘)或植株主茎上往下数5个第一次分枝顶端的蕾盘2-3个。每个蕾盘大致可分为三圈,外圈有15-25个花蕾,中圈有10-15个花蕾,内圈即花盘中间的一撮蕾。
据研究,油菜花药培养以取中圈花蕾最适宜,相应于此时期的花粉时期为单核期至双核期。 ;;2、主要作法(续):
分别取油菜主茎顶端花盘外、中、内圈花蕾,用醋酸地衣红或醋酸胭脂红涂抹制片,在显微镜下观察花粉发育时期,并接种在Miller培养基上,观察不同部位花蕾的花药产生愈伤组织百分率,填入表16-1中。 ;2、主要作法(续):
表16-1 不同部位花蕾花粉发育时期和产生愈伤组织百分率 ;1、用品(见下图):
镊子,小烧杯,接种针,75%酒精,新鲜的饱和漂白粉上清液或0.1%升汞溶液,蒸馏水,无菌水,超净工作台(或接种箱),酒精灯,各种有关培养基(见表16-3),50ml三角瓶,培养室。
;;2、主要作法:
(1)花药的接种。
用肥皂洗净双手,再用75%酒精擦洗,然后用75%酒精擦拭花盘,在超净工作台取花蕾浸入饱和漂白粉上清液或0.1%升汞溶液中浸泡10-15分钟,再用无菌水冲洗2-3次。
用镊子将花药取出投入装有培养基的三角瓶中,每三角瓶接种30个左右花药。
接种后用棉花塞塞好,用记号笔写上接种材料、日期。;;2、主要作法(续):
(2)愈伤组织的诱导
诱导花药产生愈伤组织用的培养基一般采用Miller培养基+2,4-D 1mg/L+激动素1.5mg/L。
将接种到诱导培养基上的花药置于23-28℃的恒温室内进行暗培养。
接种后4-5天花药大部分变成浅棕色或深棕色,5-10天开始产生愈伤组织,陆续可延至二个月之久。
观察记载愈伤组织长出的部位和数量。 ;1、用品
MS培养基,6苄基嘌呤,激动素,吲哚乙酸,培养室,小花钵,无土培养物。 ;培养室;2、主要作法
(1)诱导愈作组织器官分化的培养基。
一般采用MS培养基补加2mg/L6苄基嘌呤和3mg/L激动素效果很好。试比较以下不同分化培养基对花药愈伤组织分化的影响,将结果填入表16-2。 ;培养基;;(2)管理
当愈伤组织长到2-3mm大小时,转移到诱导器官分化的培养基上,置于23-28℃恒温室内,每天光照9-11小时,光强2000Lx以上。
这样愈伤组织1-3周后可见绿,再过2-3周可见到从绿点抽出一丛或一片小叶。而在愈伤组织其它部分长出根的突起,随即叶片伸展。
有时根发生稍迟,在叶伸展时才出现根的突起或更迟,这时应转移到1/2MS培养基上,可长成完整幼苗。 ;由花药长成的愈伤组织,中间出现绿点;由愈伤组织长成的叶;由愈??组织长成的叶簇;由愈伤组织长成的叶;经花药长成的小苗;经花药长成的小苗;(3)幼苗移栽
待分化好的幼苗3-4片叶时即可移栽。
移栽前先将根部的培养基冼净,然后栽入装有无土培养物的小花钵中,开始需用烧杯罩住幼苗,防止水分蒸发而死苗,待成活后取掉烧杯子。 ;;1、在油菜花药培养中,以哪个花粉发育时期花药最好,为什么?花蕾大小与花粉发育时期有无相关性?
2、哪种分化培养基的效果最好?在不同分化培养基上长出的幼苗在形态上是否一致?为什么?
3、如何提高油菜幼苗移栽成活率?有哪些关键环节?
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