分子生物学_许晓东_6 -NXPowerLite.pptVIP

6 分子生物学研究方法（下） ——基因功能研究技术;6.1 基因表达研究技术;6.1.1基因表达系列分析技术;锚定酶(Anchoring Enzyme, AE)要求至少在每一种转录物上有一个酶切位点，一般4碱基限制性内切酶能达到这种要求，因为大多数mRNA要长于256碱基。 NlaIII ;6.1.2 RNA的选择性剪接技术;选择性剪切的不同类型 a. 平衡剪切 b. 5’选择性剪切 c. 3’选择性剪切 d. 外显子遗漏型剪切 e. 相互排斥性剪切;6.1.3 原位杂交技术;mRNA的互补链，杂交信号集中于纤维细胞中。;Multiplex RNA visualization in cells using ViewRNA FISH Assays;6.1.4 基因定点突变技术;寡核苷酸介导的DNA突变技术;重叠延伸介导的定点诱变;大引物诱变法;6.2 基因敲除技术;6.2.1 基本原理;基因敲除分为完全基因敲除和条件型基因敲除（又称不完全基因敲除）两种。 完全基因敲除是指通过同源重组法完全消除细胞或者动物个体中的靶基因活性。 条件型基因敲除是指通过定位重组系统实现特定时间和空间的基因敲除。;用取代型（a）或插入型（b）载体进行完全基因敲除实验;正负筛选法（PNS法）筛选已发生同源重组的细胞;;Cre重组酶和LoxP序列: Cre重组酶：于1981年从P1噬菌体中发现，属于λ Int