蓝刺头基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化.pdfVIP

蓝刺头基因组??崛〖癛??从μ逑档挠呕???????牧嫌敕椒???閘￡?緕周俊雯张亚俞红强义鸣放??????????????．??觘?止??．?????惨丫?唐坊??渲蠦??’这个品种在美国被认为是??年模板??ǘ取??扩增的退火温度、循环次数等因素进行摸索，建立适合蓝刺头??分析的反应体良：①取???笥乙镀??谝旱V醒心ィ?R频????的离心管中；②离心管中加入??山?崛』撼??。??」?斜Ｎ???并不时轻轻旋转混匀；③加入??上???虎???恋砗怂幔虎?。?摘要本文研究了不同提取方法和不同取材部位对蓝刺头??奶崛⌒Ч?２捎胟??正交试验设计，快速、有效的确定了适合蓝刺头??分析的反应体系：反应总体积为??絃，其中??浓度为??上??????琓?聚合酶为?，模板?????笥摇Ｊ室说睦┰龀绦蛭#???预变?????由??????鲅?罚??嫜由靗??；??４妗??????蓝刺头???????????湛评洞掏肥舳嗄晟?草本植物，枝直立，植株高?—????赐纷椿ㄐ蚓?合成球形，花序别致，小花蓝紫色，具金属光泽，花期??月，观赏价值极高，是优良的鲜切花和干花材料，作为新型的切花品种深受中外消费者的青睐。目前?????????蚧ɡ洞掏?已在欧洲引种栽培用做观赏，?度最畅销的多年生宿根花卉”’。蓝刺头广泛分布于我国华北、西北等山地，在北京山区为一广布种，生态类型多，变化大，它是乡土植物，适应北京的气候特点，在城市园林绿化上应用前景广大。国内外有关蓝刺头属植物的研究报道大部分集中在其药用化学成分的分析上，对其??反应分析的研究尚未见报道，本试验对蓝刺头??反应中??浓度、引物浓度、?“浓度、??酆厦概ǘ取?系，以期为蓝刺头种质资源的研究创造条件，为其早期定向选育和杂种鉴定提供技术依据。??材料蓝刺头取材白北京昌卉景观园林有限责任公司。??酆厦浮???L旄???萍?北京?邢?公司产品，随机引物为北京奥科生物技术有限责任公司合成，??俏C拦?鶳???。??方法基因组??奶崛〖芭ǘ热范???崛》椒ǖ难芯咳〔牟课晃@洞掏芬镀??参照????????¨叫的??ǎ?⒆鍪实备?液，轻轻旋转混匀；加入????％???煸龋????煸群蟊?戏胖????????胄????宦???锨逵诹硪焕胄墓?中，加入??上?毂?迹?崆岬叩够煸龋????放置????胄?????ド??泄?┮荡笱Ч凵驮耙沼朐傲窒担?本????浓度??斗?琈??ǘ?．?性??????变性??，?℃退火复性??关键词基因组??焕洞掏罚籅??惶逑涤呕????畂???????????，?г??????··?????··???九????℃???妫??????：??：????????、?．???甐??????．???／???????，?????．?????．????，??????．?????，??????琣??????琫??????，????篍??????甈???????‘ 清，晾干沉淀??；⑥用????沉淀不溶性杂质；⑦将上清转移至另一离心管中，加???虎?℃????离心???恋鞤?，去上清报道的??法，并做适当改良：①取???笥乙?片，在液氮中研磨，转移到???的离心管中；②离摇匀，放人?。??」?斜Ｎ???；③加入至绿色或黑色?盥躺?；④??????胄????虎萋???锨逵诹硪焕胄墓苤校?苑牢?降?????离心???虎岬沟羯锨澹?玫匠恋恚??—??筁洗液，放置????晒??；⑩弃上清，放扩增反应结束后，取?鬖点人含溴化乙锭的????缓冲液溶解沉淀，加????—?????姹Ｎ耹?患尤??????岬?煸龋?℃????离心????人??山?だ涞囊毂?迹?崆峄煸龋?椅孪路胖?并用????％乙醇清洗沉淀；‘弃上清，放在通风橱中晾干，加入适量?????芙猓??℃保存备用。参照??????¨?蚐???—??????¨?心管中加入??豅预热的??和巯基乙醇缓冲液，??稬??饱和酚，??稬氯仿／异戊醇?????嵋?混匀???盖紧管盖，以防喷溅??劣谢?嘤晌奚?部杂质；⑥加????—??????保温?；⑦加??体积的异丙醇??だ涞?，小心混匀；⑧??在通风橱中晾干，加入适量????溶解。??保存。取材部位的比较用已选择的最佳提取方法分别对蓝刺头的花序、叶片、花茎、根进行??崛　???ǘ群痛慷扔肗?????一??全波长紫外／可见光扫描分光光度计测定。??．?┰龇从τ氲缬炯觳?反应体系总体积为???。扩增程序为：?℃预变性??；?℃变性??，?℃退火复性???。?由??????鲅?罚??嫜由???后??保存。选用的引物为????‘???????。琼脂糖凝胶中，用?罷?电泳缓冲液在??电压下电泳?左右，凝胶成像系统??????????观察照相。??．?从?旌衔锔髯榉峙ǘ鹊纳秆?本试验参考戴思兰?帐糁参?¨引，秦贺兰呤???瓹??