钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT2-HA融合蛋白的构建及鉴定 (1).pdfVIP

第 ??卷 第 ?期? 上海师范大学学报?自然科学版 ?? ???．??．??．?? ???????年 ?月? ??????????????????????????????????????????????????????? ???． ，??? ???? 钠 离 子依 赖 的 中性 氨 基 酸 转 运 蛋 白 ?????一??? 融合 蛋 白的构 建及 鉴 定? 董晓云，王? 函，孟? 雯，李?洋，张?舟? ?上海师范大学 生命与环境科学学院 ，上海 ???????? 摘 要：钠 离子依赖 的中性氨基酸转运蛋白 ?????在哺乳动物组织 中广泛表达，具有转运 中? 性氨基酸的功能，在谷氨酸 一谷氨酰胺循环、肝脏糖质新生等生物通路 中发挥重要作用．为 了? 方便测定 ?????在 细胞膜上的表达和定位，本研究采用 ???扩增和酶切连接将 ??标签蛋白? 与 ?????的 ?末端连 接 ，构建 了真核 生物表 达载 体 ???— ?????????— ?????一?????一??? 表达载体．用脂质体转染法将该表达载体瞬时转染到 ???????细胞 中，通过 ????????????法检? 测到 ?????一?? 融合 蛋 白在 细胞 膜上 的正确表 达和 定位．???— ???△?????— ?????一? ?????一??表达载体的成功构建 ，为今后对 ?????的结构和功能的研究提供 了有效方法．? 关 键词 ：中性 氨基 酸 转运 蛋 白 ?????；融合 蛋 白 ；构建 和鉴 定? 中图分 类号 ：????? 文 献标识 码 ：?? 文章 编号 ：?????????????????????????? ?? 引? 言? 钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋 白 ???????— ??????????????????????????????????????，?????属于? ?????基 因家族．根据各成员的对转运底物的偏爱性 ，?????家族 又分为 ????????和 ????????两个亚? 族 ，其 中 ????????中包括 ?????、?????和 ?????，偏爱转运丙氨酸?????????；????????包括 ?????和? ?????，偏爱转运含氮侧链 的氨基酸 ，如谷氨酰胺 ???????????¨?．? ?????是 ????????中的第二个成员 ，在哺乳动物组织 中广泛表达，主要转运丙氨酸 、天冬酰胺 、半? 胱氨酸 、谷氨 酰胺 、甘氨酸 等 中性 脂肪 族氨基 酸．?????由 ???个 氨基 酸残基 组成 ，理论分 子量 为? ??????，被预测具有 ??个跨膜区域 ?????．?????在转运氨基酸的过程中以 ?：?的比例共转运钠离子? 进入细胞 ，对细胞外的钠离子浓度具有依赖性 ，转运过程可被低 ??抑制?．??．?』．同时 ，?????还受