农杆菌VirD2蛋白的定位特异性改造.pdfVIP

? 嚷?? 是? ?????????????：????：????．?????????．???? 农盟生牲 技木学报? 农 业 生 物 技 术 学 报? ■●啊 ? ?????????????????????????????????????? 嘲 ? ? ? ????，?????：???～???? 罂? ???：??．????／?．???．????—????．????．??．???? 技术改进? ??????????????????? 农杆菌 ?????蛋 白的定位特 异性改造? 陈友龙 陈吉裕 李翠萍 苏承 刚 张兴 国? 南方 山地园艺学教育部重点实验室，重庆市蔬菜学重点实验 室，西南大学园艺园林学院，重庆 ??????? 通讯作者，?????????????．???? 摘要 农杆菌???????????????????????????????蛋 白具有与单链 ?．???????．????共价 结合并将其转运至? 植物细胞核，将外源基 因高效整合进核基因组的功能；如果将该蛋白改定位于质体，则有可能利用其将外源? 基因携带进质体，建立质体转化新方法 。本研究对 ?????蛋 白的定位信号进行 了改造，采用重叠延伸 ???突? 变技术对 ?????的 ?端核定位信号?????编码序列进行 点突变 ，对 ?端编码序列实施缺失突变 ，并在合成的? 突变 ?????????????基 因 ?’端连接上增强绿色荧光蛋 白???? 报告基 因，在其 ?’端加上或不加源 自拟南芥? ????????????????????冷调节基因? ????????的质体定位信号肽编码序列，分别构成 ??—??????．????和? ??????．????嵌合基因，由?????????启动子控制 ，经农杆菌介导整合进烟草???????????????????核基因组 。? 荧光检验显示，??????带质体定位信号时绿色荧光集 中于叶绿体，??????不带质体定位信号时绿色荧光弥? 散在细胞质中，且两者的细胞核均无荧光 ，表 明??—??????一????嵌合基因表达的蛋 白具有质体定位特性，并? 失去了核定位能力 。该结果为今后探讨利用 ??—??????融合蛋 白将外源 ???主动定向牵 引进质体，实现质? 体高效转化研究提供基础资料。? 关 键词? 烟 草 ，?????????信 号肽 ，??—??????．?? 嵌合 基 因 ，质 体 定位? ??