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基于高密度培养的两阶段发酵技术 生产热凝胶的研究 马立伟，詹晓北，吴剑荣 江南大学生物工程学院，工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡 (214122) E-mail: xbzhan@ 摘 要：微生物多糖在发酵过程中产生的高传氧阻力限制了高密度发酵技术在发酵过程中的 直接应用，削弱了微生物多糖发酵的生产强度。本文根据热凝胶发酵过程中不同时间和空间 对氧传质的不同需求，实施两阶段发酵工艺：第一阶段在种子罐中实施高密度培养，第二阶 段在发酵罐中稀释细胞密度，使微生物直接进入产胶阶段，同时解除氧传质对产热凝胶的限 制作用，达到高强度发酵生产热凝胶的目标。通过对两阶段发酵工艺的构建和优化，结果表 明该工艺较好地满足菌体生长和热凝胶合成对营养和氧传质的不同要求，热凝胶产量达到 66 g/L，相对于分批发酵工艺产胶量提高了 106％，比产胶速率提高了 20％，并且在菌体生 长阶段发酵规模比分批发酵缩小了 75%，因此节约了能量，降低了功率消耗。 关键词：粪产碱杆菌，热凝胶；两阶段发酵；高密度培养 中图分类号：Q815 文献标识码：A 0. 前言 热凝胶是由粪产碱杆菌（Alcaligenes faecalis var myxogene）在氮源限制条件下生成的胞 外多糖，是一种水不溶性的 β-(1,3)-D-葡聚糖，具有独特的热成胶特性，在食品中具有广泛 的应用[1]。 国内外关于热凝胶生产的研究主要集中在营养物质添加、pH 控制、搅拌速度和反应器 设计对热凝胶产量的影响[2,3,4,5]。热凝胶是一种典型的非生长偶联性产物，Lee 等人[6]提出了 结合 pH 控制和提高生物量的两阶段发酵观点，首先通过调节氮源的数量来控制菌体浓度， [7] 接着进行热凝胶发酵。本实验室前期研究 是通过提高分批发酵中初始 NH4Cl 浓度的办法来 提高生物量，从而来提高热凝胶的产量；然而过高的 NH4Cl 浓度会不利于细菌的生长，发 酵液中残留的铵离子，还会抑制热凝胶的合成。 微生物多糖发酵属于高粘度发酵，在发酵过程中产生的高传氧阻力限制了高密度发酵技 术在发酵过程中的直接应用，但由于大部分微生物多糖均属于次级代谢产物，若将微生物细 胞培养与多糖合成分为两个阶段进行，第一阶段在种子罐中以低 C/N 营养条件促进快速高 密度培养微生物，第二阶段在发酵罐中稀释细胞后以高 C/N 营养条件高强度生产微生物多 糖，使细菌直接进入产胶期，既解除发酵体系高传氧阻力与细胞高耗氧需求的矛盾，又满足 微生物多糖合成阶段与菌体生长阶段的不同营养需求。采用在不同规模发酵罐中实施的两阶 段发酵工艺，一方面将减少菌体培养阶段的设备规模，节省大型发酵罐在发酵过程中的功率 消耗和能量消耗，另一方面将提高细胞培养和多糖合成的生产强度，使生产过程达到节能降 耗的目的。 1. 材料与方法 1.1 菌种 粪产碱杆菌 WX-C12（Alcaligenes faecalis var. myxogene），江南大学生化工程实验室保 存。 - 1 - 1.2 培养基 斜面培养基(g/L)：葡萄糖 40，酵母膏 5，琼脂 20，CaCO3 10，pH 7.0-7.2。 摇瓶种子培养基(g/L)：葡萄糖 20，酵 母 膏 10，KH2PO4 1.74，MgSO4·7H2O 0.49，pH 7