细胞化学染色是.ppt

细胞化学染色实验;一、过氧化物酶(Peroxidase Stain，POX)染色;【器材和试剂】 1．第一液 联苯胺 0．3g 360g／L亚硝基铁氰化钠饱和液 lml 95％L醇 加至 lOOml 贮存于棕色瓶中，可保存一年。小瓶分装备用。 2．第二液 (稀过氧化氢液，新鲜配制) 3％过氧化氢 0．3ml 蒸馏水 　　 25ml ;【步骤和方法】 1．于新鲜干燥血涂片或骨髓涂片上，滴加第一液5--8滴，使盖满整个血膜，作用1--2min. 2．滴加等量的第二液，混匀，染4--8min。 3．勿倾去染液，直接用水冲洗。 4．干燥后再用瑞氏染液复染。;【结果】 在细胞的胞浆中出现蓝色或蓝棕色颗粒为阳性反应。 1．阳性反应强度的判断： 阴性：无颗粒。 弱阳性：颗粒小，分布稀疏。 阳性：颗粒略粗，分布较密集。 强阳性：颗粒粗大，密布于整个胞质中。; 2．粒细胞系统：早期原始粒细胞阴性，晚期(分化好)原始粒细胞以下各阶段呈阳性，粒细胞越成熟POX反应越强。但衰老的中性粒细胞酶活性降低，反应程度减弱，甚至呈阴性反应。嗜酸性粒细胞颗粒更粗大，呈深蓝色，嗜碱性粒细胞阴性。 ;3．单核细胞系统：除早期原始阶段外皆呈弱阳性反应。其颗粒细小，弥散分布，可覆盖核上，有的也可呈阴性反应。 4．正常网状细胞(分化型)及吞噬细胞：可呈不同程度阳性反应。 5．淋巴细胞、浆细胞、红细胞、巨核细胞系统等：均为阴性。 6．Auer小体：呈阳性。 ;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;【临床意义】 POX染色是鉴别急性粒细胞白血病(简称急粒)、急性单核细胞白血病(简称急单)、急性淋巴细胞白血病(简称急淋)类型的重要细胞化学方法。;1．急性粒细胞白血病：细胞分化较好时，原始粒细胞呈阳性反应，阳性率可30%，在分化较差的白血病，如AML-M0和未分化型（AML-M1）的部分病例，原粒细胞的POX染色也可呈阴性。 2．急性早幼粒细胞白血病时白血病细胞呈强阳性反应。 ;3．急性淋巴细胞呈阴性反应，FAB分型规定POX阳性率3％。 4．急性粒单细胞白血病：原始细胞POX染色多呈阳性，阳性率一般20%，但难于区分原粒和原单时可进一步作酯酶染色鉴别。; 5、急性单核细胞白血病：原单和幼单POX多呈弱阳性或阴性，单核细胞呈弱阳性，阳性率常3%，阳性颗粒较为细小、稀疏。 　　; 6、中性粒细胞髓过氧化酶缺陷症：中性粒细胞POX染色，纯合子呈阴性，杂合子多为弱阳性。在一些髓系细胞白血病，如部分慢性髓细胞白血病（CML）患者，中性粒细胞POX染色可呈阴性或弱阳性，提示POX获得性缺陷。;【注意事项】　 1．过氧化氢必须新鲜配制。过氧化氢的最适浓度是0．05mol／L左右，浓度过高，反而抑制酶作用。一般采用5ml蒸馏水，加3％过氧化氢一滴。若用30％的过氧化氢时，只能在100ml蒸馏水中加1～2滴。涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即示过氧化氢过浓。若过氧化氢加于血片上不产生气泡，则示无效。 ;2.染色时稀释过氧化氢之后必须与联苯胺液充分混合，否则同一涂片细胞染色情况不一致。;【评价】 POX染色是鉴别急性白血病类型最常用的细胞化学染色方法。但若原始细胞均呈阴性（阳性率3％），并不能肯定是急性淋巴细胞白血病，因为分化较差的白血病性原粒细胞、原单细胞、原巨核细胞、原淋巴细胞均可呈阴性，此时应结合其他细胞化学染色、细胞免疫表型分析等进行鉴别。;二、铁 染 色(Iron Stain);【材料】 1.酸性亚铁氰化钾溶液 取200g／L亚铁氰化钾溶液置于试管中，缓缓滴加浓盐酸，边滴边摇匀，至出现白色沉淀，再滴加200g／L亚铁氰化钾溶液，亦边滴边摇匀，至白色沉淀消失为止，备用。 2．2g／L核固红-硫酸铝溶液 取硫酸铝2g溶于100ml蒸馏水中，再加入核固红 (Emerk出品)0.2g。置37℃水浴中1h并随时振荡，使溶解，过滤后使用。;【步骤和方法】 1.选