细胞运动和迁移检测方法的比较与选择.doc

细胞运动及迁移检测方法的比较与选择 关键词：细胞 仪器 分析仪 试剂 标准物质 北京标准物质网 一.transwell试验 transwell技术是检测 HYPERLINK /HTML_Products/59/products_2359.html \o 全血细胞溶液标准物质 细胞运动能力的经典方法，由于其原理简单、操作相对简便，该法目前已被广泛用于检测不同类型 HYPERLINK /HTML_Products/59/products_2359.html \o 全血细胞溶液标准物质 细胞的运动能力。内室底部的薄膜是整个实验装置的核心部分，待测细胞的直径决定了薄膜孔径的选择。通常情况下，薄膜的孔径应略小于细胞的直径以防止细胞直接漏入到外室。transwell试验对细胞运动和迁移能力的评价主要依赖于对转移至底膜外侧细胞的染色和计数。甲紫是transwell试验中常用的 HYPERLINK /HTML_Products/59/products_2359.html \o 全血细胞溶液标准物质 细胞染料，在染色前需要使用棉签将底膜内侧的细胞拭去以免残余的细胞着色后影响最终的细胞计数和统计。然而，通常使用棉签很难将膜内侧的细胞全部拭去，因此这是制约本试验精确度的主要因素之一。同时，甲紫染色后的细胞计数常由操作者在显微镜下完成，导致实验的最终结果缺乏稳定性和准确度。此外，该方法只适宜于终点检测法，难以实时 HYPERLINK /HTML_Products/26/products_226.html \o 食品检测用亚硝酸钠溶液标准物质 检测细胞的运动变化。 目前已有改良的方法或实验装置可弥补以上几点不足。如在对发生迁移的 HYPERLINK /HTML_Products/59/products_2359.html \o 全血细胞溶液标准物质 细胞进行定量分析时，可以荧光染料将细胞着色，而后将底膜外侧的细胞经处理(如 HYPERLINK /HTML_Products/29/products_103929.html \o 胰酶 胰酶等)转移至计数板内，使用电子计数器对细胞总数进行定量 HYPERLINK /HTML_Products/9/products_97109.html \o 土壤成分分析标准物质-黄红壤 分析。又如Roche和AceaBio公司联合开发的xcELLigenee系统，将经典的transwell实验装置与微电子阻抗感应系统整合，实现了对细胞运动的实时监测。微电子阻抗系统所检测到的微电阻与细胞的数量，伸展状态，贴壁紧密程度等多项生理指标密切相关，将其整合于内室底部微孔膜的下表面上，当细胞迁移至微孔膜底面时，则可引起 HYPERLINK /HTML_Products/59/products_2359.html \o 全血细胞溶液标准物质 细胞微电阻的升高，通过记录微电阻的变化可精确的反映细胞的运动状态。该系统提高了传统transwell的精确度，同时可以获取细胞运动的实时动态数据。然而，由于该系统需要借助于特殊的 HYPERLINK /HTML_Products/27/products_47827.html \o ICP—MS仪器校准用溶液标准物质(铍铟铋混合标准溶液) 仪器设备，且成本相对较高，因此常应用于大规模及高通量的筛选工作。 二、二维平面内细胞运动的检测方法 ?1.划痕试验? 原理简单，操作便捷，不需要借助特殊的实验仪器，适用于任何具有贴壁特性的细胞，因此在细胞运动的检测中应用广泛。本方法中，细胞运动的能力反映为划痕宽度的变化，通常情况下划痕由实验操作者以移液器的吸管端划出，导致划痕的宽度并不均一，因此在一定程度上影响了划痕愈合度的评估。同时，有观点认为超过24小时的检测并不能排除细胞增殖对划痕愈合的影响，尽管在实验过程中通过降低培养基的血清浓度可在一定程度上削弱细胞增殖的影响，但划痕试验中观察时间点的设置仍宜控制在24小时以内。此外，在人为制造划痕时可对周围细胞产生一定的机械损伤，可能会影响划痕边界周围细胞的活性和运动潜能。同时，脱落的部分细胞可能在培养板静置后重新在无细胞区域定植和迁移，从而制造划痕愈合的假象。 目前，Applied BioPhysics公司推出了基于微电阻感应系统的划痕试验装置。借助于整合在细胞培养板l的电极，通过电流的脉冲刺激可产生宽度恒定均一的无细胞区域。同时通过检测无细胞区域的微电阻的增加，可以判断细胞向内迁移的数量。这种改良后的装置实现了实验条件的标准化和实验结果统计的精准化，但其对设备器材的要求和成本均相对较高。 2.细胞排斥区检测? 该方法适宜于贴壁细胞运动能力的检测。与划痕试验相比，由于阻碍物事先已置于细胞培养板中，因此该方法中形成