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第十二章 荧光分析法;;;;光致发光 物质受到光的照射时，除吸收某种波长的光还会发射出比原来所吸收的波长更长的光的现象。 荧光 物质分子接受光子能量被激发后，从激发态的最低振动能级返回基态时所发射的光。 分子荧光和原子荧光 ;第一节 荧光分析法的基本原理;S2;振动驰豫 激发态各振动能级的分子通过碰撞释放能量，返回同一电子激发态的最低振动能级的过程。 内部能量转换 当两电子激发态能量相差较小以致其振动能级有重叠时，受激分子由高电子能级转移致低电子能级的过程。 （振动失活在同样多重态间进行，如S2*? S1*）;外部能量转换 激发态分子与溶剂或其它溶质碰撞，以热能的形式释放能量的过程。 体系间跨越 处于激发态分子的电子发生自旋反转而使分子的多重性发生变化的过程，如S1*? T1*;荧光发射 第一激发单重态的最低振动能级 基态（任一振动能级） 发射荧光的过程约为10-9~10-7s 磷光发射 激发三重态的最低振动能级 基态（任一振动能级） 发射磷光的过程约为10-4~10s或更长 磷光法不如荧光法普遍;（二）荧光的激发光谱和发射光谱; 荧光光谱特征;1. 斯托克斯位移 荧光发射波长总是大于激发波长的现象 1852 Stokes 位移 2. 荧光发射光谱与激发波长无关 荧光发射光谱只有一个发射带 第一激发单重态的最低振动能级?基态各振动能级 3. 荧光光谱与激发光谱的镜像关系 基态与激发态的振动能级间隔类似 激发光谱：基态?激发态各振动能级 荧光光谱：激发态?基态各振动能级;二、荧光与分子结构;荧光效率;（二）有机化合物分子结构与荧光的关系;1. 长共轭结构;2. 分子的刚性;3. 取代基;（三）荧光试剂;三、 影响荧光强度的外部因素;2. 溶剂;3. 酸度; 下列中能使苯胺引起荧光熄灭的是（ ） A. 乙醇 B. 盐酸 C. 水 D. 硫酸;4. 荧光熄灭剂;由于氧分子的顺磁性质，溶液中溶解氧的存在，使激发单重态分子向三重态的体系间跨越速率增加，因而会使荧光效率降低。其它顺磁性物质也有这种作用。;5. 散射光;溶剂中杂质的荧光光谱或溶剂的拉曼光谱可能干扰???定。 溶剂在不同波长的激发光照射下，其拉曼光的波长随激发光波长的变化而变化，而物质的荧光波长不变，所以可以通过选择适当的激发波长来消除拉曼光的干扰。; 荧光法测定硫酸奎宁时，激发光波长若选择在320nm，拉曼光波长为360nm；若激发光波长选择在350nm，拉曼光波长为400nm。荧光波长为448nm。则测定时选择波长应为（） A. ?ex320nm ?em 400nm B. ?ex320nm ?em 360nm C. ?ex350nm ?em 448nm D. ?ex320nm ?em 448nm;第二节 荧光定量分析方法;二、定量分析方法;第三节 荧光分光光度计和分析新技术;荧光分光光度计结构示意图 1.光源 2、4、7、9. 狭缝 3.激发单色器 5.样品池 6.表面吸光物质 8.发射单色器 10.检测器 11.放大器 12.指示器 13.记录器; 在测量分子荧光强度时，要在与入射光成直角的方向上进行测量，这是由于（ ） A. 只有在入射光线成直角的方向上才有荧光 B. 荧光强度比透射光强度小 C. 荧光强度比透射光强度大 D. 荧光波长比透射光波长长 E. 荧光是向各个方向发射的，为了减小透射光的影响;2. 仪器的校正;3. 荧光分析法的应用;（2）有机化合物的分析;二、荧光分析新技术简介;