免疫学实验的.docVIP

实验四 免疫学实验 一、机体体液免疫功能测定 （一）凝集反应 【目的】 了解玻片凝集试验、试管凝集试验及胶乳间接凝集抑制试验的操作过程、结果分析和实际应用。 【原理】 颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应抗体在一定电解质存在的条件下发生特异性结合并出现肉眼可见的凝集块的现象称为凝集反应。凝集反应既可用已知抗体检查和鉴定未知的抗原(如鉴定细菌)，也可用已知抗原检查血清中相应的抗体；既可用作定性检测，又可用于定量检测。 凝集反应分两种。一种是颗粒性抗原与抗体直接结合出现的凝集现象，称为直接凝集反应；另一种是将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关的载休颗粒表面，再与相应的抗体结合而出现的凝集反应，称为间接凝集反应。如将抗体吸附于载体颗粒表面，再与相应的抗原结合而出现的凝集反应则称为反向间接凝集反应。 1、玻片凝集反应 【材料】 伤寒??断血清、伤寒沙门菌及大肠埃希菌培养物、载玻片、生理盐水等。 【方法】 生理盐水　伤寒诊断血清　伤寒诊断血清　 伤寒沙门菌　伤寒沙门菌　大肠埃希菌 左　 　　中　 　　右 ＋　　　　＋　　　　＋ ①取载玻片1张，左侧加生理盐水1滴，中间 及右侧各加伤寒诊断血清1滴； ②用接种环取伤寒沙门菌培养物少许，分别 与盐水及中间的伤寒诊断血清混匀。同法取大肠 埃希菌培养物与右侧伤寒诊断血清混匀； ③轻轻摇动玻片1～2min后，观察结果； ④观察后，将玻片直接投入消毒缸，不要冲 洗，以防污染。 【结果 】 出现凝集物者为阳性反应，均匀混浊无凝集物 者为阴性反应。 【注意事项】　　　　　　　　　　　　　　　　　　　玻片凝集反应 ①用接种环取一种试剂前后均需进行烧灼，不可有杂菌污染以及前一试剂残留。 ②用接种环取细菌时应先烧灼灭菌，待冷却后方可挑取细菌。 ③用接种环加细菌于血清中后，应先烧灼接种环，再取细菌加入另一血清中。 【结果分析】 左： 中： 右： 　　 　 应用： 　　　 2、试管凝集反应 试管凝集反应为半定量试验，常用已知抗原检测患者血清中相应抗体的效价。 【材料】 伤寒诊断血清(抗体)、伤寒菌液(抗原)、生理盐水(NS)、刻度吸管、试管等。 【方法及结果】见表 试管凝集反应的方法 试　　管　　　　 1 　 2 3 4 5 6 7生理盐水(ml) 　　　　0.9 　0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 弃去0.5 0.5 伤寒诊断血清(ml) 0.1 　　 0.5 0.5 0.5 0.5 .. 0.5 ＋NS 0.5 血清稀释倍数 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 对照 菌液(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 血清最终稀释倍数