生物化学检验的实验室基本知识.doc

 PAGE 52 第二章 生物化学检验实验室基本知识 学习目标 掌握诊断试剂盒的选择与性能指标评价，实验方法与参考物质的分级，五种方法学评价试验的目的、原理、操作、计算及注意事项。 熟悉化学试剂的选择、保存与配制，常用临床实验室器材的使用及玻璃仪器的清洗，参考范围和医学决定水平，实验方法与参考物质的相关基本概念，实验方法的正确选择，诊断试验的性能评价。 了解实验用纯水。 掌握好临床实验室的基本知识，包括实验用纯水，实验室常用器材、试剂、试剂盒，参考范围和医学决定水平，实验方法与参考物质，方法学评价试验，临床诊断性能评价等，才可能保证检测结果的准确度与精密度，能够促进实验室与临床的沟通，因此其对于从事生物化学检验的实验室工作者非常重要。 第一节 实验用纯水 实验用纯水指天然水和自来水经过蒸馏、离子交换、活性炭吸附、超滤等处理后除去了杂质的水。其质量的高低直接影响到检测结果的准确度和精密度。 一、实验室用水等级 1985年美国国家临床实验室标准委员会（national committee for clinical laboratory standards，NCCLS）将实验用水分为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级（表2-1）。中国国家技术监督局先后于1992年、2000年批准实施的《中国国家验室用水标准》（GB6682-92、GB6682-2000），也将分析实验用水分为三个等级（表2-2），两次的区别主要是电导率的计量单位不同。 表2-1 美国NCCLS等级纯水的规定及用途(1985) 级 别Ⅰ级Ⅱ级Ⅲ级pH未定未定5.0～8.0电阻率(MΩ·cm, 25℃,最大量)102.01.0硅(mg SiO2/L,最大量)0.050.11.0微生物含量（每毫升最大菌落数）10103未定硅（mgSiO2/L，最大量）0.050.11.0微粒0.2μm微孔膜过滤未定未定有机物质活性碳过滤未定未定用途原子吸收，火焰光度，荧光，电解质，酶，高效层析，电泳，参比液，缓冲液。一般实验室检验，器皿冲洗。器皿洗涤，要求不高的定性试验。 　　 表2-2 中国国家验室用水GB6682-2002标准 名　称一级二级三级pH范围(25℃)　　　－（未定）－5.0～7.5?电导率（25℃）ms/m ≤?0.010.100.50?比电阻（25℃，MΩ·cm）≥1010.2?可氧化物质（以O计）mg/L??＜－0.080.40?吸光度（254nm，1cm光程） ≤?0.0010.01－?蒸发残渣（105±25℃）mg/L ≤－1.02.0?可溶性硅（以SiO2计）mg/L??＜?0.01?0.02－　　　　可见，Ⅰ级（一级）水最好。临床实验室一般选用Ⅱ级（二级）水即可。水越纯，所含离子就越少，则电阻越大，导电性越差，即电阻率（比电阻）越大，电导率越小。同时，水越纯，所含的SiO2、细菌数、有机物等越少。 二、纯水的制备方法 （一）蒸馏法 自来水(或天然水)在蒸馏器中进行加热气化，水蒸气经冷凝后得到蒸馏水（distiled water，DW）。 蒸馏水的电阻率约为0.1MΩ·cm（25℃）。 (二) 离子交换法 将自来水通过离子交换树脂以除去水中杂质离子，称为离子交换法。离子交换法制备去离子水（deionized water，DW）的原理是水中的杂质离子先通过扩散进入树脂颗粒的内部，然后水中的Na+、Ca2+等与阳离子交换树脂中的活性基团H+发生交换，水中的Cl-、SO42-等则与阴离子交换树脂中的活性基团OH-发生交换。由于树脂为多孔网状结构，具有非常强的吸附能力，可以同时除去颗粒杂质。 去离子水的电阻率约为5.0MΩ·cm（25℃）以上。 蒸馏水与去离子水的英文缩写均为DW。因蒸馏水里面有挥发性物质、有离子干扰，故临床实验室多用去离子水，或先蒸馏、后去离子的纯水。 (三)其他方法 在制备纯水时，还可采用超滤膜法（除细菌等），活性炭吸附法（除有机物）等，以及采用活性炭吸附法、去离子树脂、超滤膜法等步骤的混合纯化系统。与自动生化分析仪配套的纯水机一般采用混合纯化系统，要求其纯水电阻率大于2.0MΩ·cm（25℃）。 三、水的纯度检查 水的纯度检查首先测定电阻率或电导率，然后检测残留物含量。 1.电阻率 利用电导仪或兆欧表测定。电导仪测得的电导率可与电阻率换算：电导的单位是西门子(S)，电导(S)与电阻(Ω)互为倒数。电导率为每cm长的电导(S/cm)，电导仪的表头读数单位为μS/cm，因此电导仪读数为1时，电阻率为1×106Ω·cm = 1MΩ·cm。 GB668