乳酸脱氢酶及辅酶实验报告(共7篇).doc

乳酸脱氢酶及辅酶实验报告(共7篇) 酶_生化试验报告 生物大分子·酶 ——相关生化实验报告 小组成员：王书洋 张斌 贾官斐 杨翀 左天宇 单位：武警后勤学院临床医学系四队 四班 邮编：300162 关键词 淀粉酶; 活性; 温度; 抑制剂; 激活剂; 专一性 【前言】 目前临床主要以检测指标作为依据对疾病的诊断作出较为准确的判断。其中，酶学上的应用占了相当一部分。所以，从临床疾病诊断以及治疗的角度去对酶学知识的具体化了解和应用深化是十分有必要的。酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋白，几乎所有的生化反应都离不开酶的催化。因此，一切对蛋白质活性有影响的因素都影响酶的活性。酶与底物作用的活性，受温度、pH值、酶液浓度、底物浓度、酶的激活剂或抑制剂等许多因素的影响。对酶活性的测定对临床诊断以及基础医学的研究都有着重要意义。很多酶其实包含几种具有同样催化效用的蛋白质，但它们的分子组成、理化性质与免疫学特性却有明显差异，这类蛋白质统称为该酶的同工酶。同工酶在组织和器官中的分布不同，通过测定不同同工酶的含量与活性的变化，可以推算出改组织和器官的变化。本综述旨在对后文的三次实验作为基础医学和临床医学的一次应用上的联系。 实验一影响酶促反应速度的因素 【实验原理】 唾液淀粉酶催化淀粉水解生成各种糊精和麦芽糖。淀粉溶液与碘反应呈蓝色；糊精根据分子大小，与碘反应分别呈蓝、紫、红、无色等不同的颜色；麦芽糖不与碘呈色。唾液淀粉酶的活性受温度、酸碱度、抑制剂与激活剂等的影响。 温度：温度降低，酶促反应减弱或停止；温度升高，反应速度加快。当上升至某一温度时，酶促反应速度达最大值，此温度称为酶的最适温度。由于酶的化学本质是蛋白质，温度过高会导致蛋白质构象的改变，因此如果温度继续升高，反应速度反而会迅速下降甚至完全丧失。 酸碱度：唾液淀粉酶最适pH为pH6.9，高于或低于酶的最适pH值，都将引起酶活性的降低，过酸或过碱的反应条件可使酶活性丧失。 抑制剂与激活剂：酶的活性常受某些物质的影响，能增加酶的活性称为酶的激活剂：降 -2+ 低酶活性且不使酶蛋白变性的称为酶的抑制剂。如Cl为唾液淀粉酶的激活剂，Cu为唾液淀粉酶的抑制剂。 根据上述性质，可以用碘检查淀粉是否水解及其水解程度，间接判断唾液淀粉酶是否存在及其活性大小。 【标本】 唾液 【测定方法】 试剂：1％淀粉溶液，1％氯化钠溶液，1％硫酸铜溶液，1％硫酸钠溶液，碘液，磷酸氢二钠（0.2mmol/L）, 柠檬酸溶液(0.1mmol/L)。 器材：试管，试管夹，恒温水浴锅(37℃),吸管，滴管，试管架， 操作： 1.收集唾液：实验者先将痰咳尽, 用自来水漱口, 清除口腔内食物残渣, 再含蒸馏水约15 mL, 作咀嚼咕漱运动, 3min 后吐入垫有两层经润湿处理的脱脂纱布的漏斗内, 过滤气泡及食物残渣后于小烧杯中备用。 2.观察温度对酶促反应速度的影响 取试管3支，编号1,2,3，按下表操作： 3. 观察pH对酶促反应速度的影响 4观察激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响 取试管4支，编号1,2,3,4，按下表操作： 【结果及讨论】 温度对酶促反应的影响 ：此组实验的三个试管模拟人体的环境即近中性,通过观察不同温度下酶活性强弱, 证明温度对酶活性有很大影响。1号试管的颜色变化比较大, 无色时淀粉被完全分解为单糖, 晴褐色时淀粉不完全分解, 蓝色时淀粉完全没被分解, 浅蓝色时少许被分解; 也就是说不同人的唾液淀粉酶活性在100℃时受影响的程度不同, 有的被完全抑制, 有的部分受影响, 而有的和在37℃时相比几乎无变化。2号试管无色, 说明淀粉完全被分解为单糖, 不能与碘发生颜色反应;通观3号试管发现唾液淀粉酶活性在0 ℃时大都被抑制, 或是完全被抑制或是大部分被抑制。 pH 值对酶促反应的影响 ：此组实验在37 ℃下设置三个pH 值: 5. 0 ( 酸性) 、6. 8( 近中性) 和8. 0( 碱性) 。通过各个试管的颜色判断酶活性强弱。酶活性比较强时, 淀粉完全分解, 显示无色或碘液的浅黄色; 号试管颜色相近,酶活性比较弱时, 淀粉不能被完全分解, 依被分解的程度不同显示不同的颜色。相比较1均为晴褐色, 说明其中的淀粉被分解为多糖, 也就是淀粉酶在酸性环境中能发挥作用; 而在3 号试管的碱性环境中, 淀粉酶发挥作用的强弱程度不同, 有的能将淀粉部分分解, 颜色呈现棕而言, 2 号试管的颜色最浅, 说明37℃时酶活性最强, 淀粉被完全分解。黄色, 有的不能分解, 呈深蓝色。 激活剂和抑制剂对酶活性的影响 ：在37℃、近中性环境中, 设置对照( 蒸馏水) 、0. 9% NaCl、1% CuSO4、1% Na2SO4 的四组实验, 通过观察颜色, 判断